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  • 基因工程實驗 科學與自然 殷武主編 科學出版社 9787030378040
    該商品所屬分類:圖書 -> ε
    【市場價】
    243-352
    【優惠價】
    152-220
    【出版社】科學出版社 
    【ISBN】9787030378040
    【折扣說明】一次購物滿999元台幣免運費+贈品
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    內容介紹



    出版社:科學出版社
    ISBN:9787030378040
    商品編碼:68387497197

    開本:16開
    出版時間:2013-06-01
    頁數:99

    字數:170000
    代碼:29

        
        
    "
      商品基本信息,請以下列介紹為準
    商品名稱:基因工程實驗
    作者:殷武主編
    代碼:29.0
    出版社:科學出版社
    出版日期:2013-06-01
    ISBN:9787030378040
    印次:1
    版次:1
    裝幀:平裝
    開本:16開

      內容簡介
    基因工程是一門實用性很強的學科,涉及生命科學的多學科領域。本書以用於檢測細胞凋亡的Annexin Ⅴ-EGFP為例,繫統介紹了從基因克隆、蛋白質表達純化、蛋白質功能檢測到後應用方面的實驗方法。
    本書適用於初步接觸基因工程實驗的高年級本科生,或從事相關研究的科研人員。

      目錄
    叢書序
    叢書前言
    章 Annexin Ⅴ-EGFP基因克隆與表達載體構建
    實驗1 Annexin Ⅴ表達序列檢索
    1.實驗目的
    2.實驗原理
    3.實驗方法與結果
    實驗2 Annexin Ⅴ-EGFP基因克隆設計
    1.實驗目的
    2.實驗原理
    3.實驗方法
    實驗3 哺乳動物細胞中提取RNA
    1.實驗目的
    2.實驗原理(異硫氰酸胍酚氯仿一步法)
    3.實驗儀器與器材
    4.試劑與配制
    5.實驗步驟
    6.實驗結果分析與討論
    7.思考題
    實驗4 逆轉錄PCR與產物鋻定
    1.實驗目的
    2.實驗原理
    3.實驗方法
    4.實驗步驟
    5.實驗結果與討論
    實驗5 PCR產物的酶切與克隆
    1.實驗目的
    2.實驗原理
    3.實驗儀器與器材
    4.試劑與配制
    5.實驗步驟
    實驗6 克隆鋻定
    1.實驗目的
    2.實驗原理
    3.實驗儀器與器材
    4.試劑與配制
    5.實驗步驟
    實驗7 大腸杆菌感受態的制備
    1.實驗目的與要求
    2.實驗原理
    3.實驗儀器與器材
    4.試劑與配制
    5.實驗步驟
    參考文獻
    第二章 Annexin Ⅴ-EGFP質粒的擴增與提取
    實驗8 Annexin Ⅴ-EGFP質粒的擴增
    1.實驗目的
    2.實驗儀器與器材
    3.試劑與配制
    4.實驗原理
    5.實驗步驟
    實驗9 Annexin Ⅴ-EGFP質粒的提取
    1.實驗目的
    2.實驗原理與方法
    3.實驗儀器與器材
    4.試劑與配制
    5.實驗步驟
    6.質粒提取常見問題
    參考文獻
    第三章 Annexin Ⅴ-EGFP基因的表達與純化
    實驗10 Annexin Ⅴ-EGFP基因的表達
    1.實驗目的
    2.實驗原理
    3.實驗儀器與器材
    4.試劑與配制
    5.實驗步驟
    6.注意事項
    7.討論
    8.思考題
    實驗11 Ni-NTA親和層析純化融合蛋白His6-EGFP-Annexin Ⅴ
    1.實驗目的
    2.實驗原理
    3.實驗儀器與器材
    4.試劑與配制
    5.實驗方法
    6.注意事項
    7.討論
    8.思考題
    參考文獻
    第四章 Annexin Ⅴ-EGFP重組蛋白質的應用檢測
    實驗12 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離蛋白質
    1.實驗目的
    2.實驗原理
    3.實驗儀器與器材
    4.試劑與配制
    5.實驗方法
    6.注意事項
    7.討論
    8.思考題
    實驗13 蛋白質轉移印跡法檢測Annexin Ⅴ-EGFP基因表達
    1.實驗目的
    2.實驗原理
    3.實驗試劑
    4.實驗儀器
    5.實驗步驟
    6.注意事項
    7.討論
    8.思考題
    實驗14 流式細胞儀檢測凋亡細胞
    1.實驗目的
    2.實驗原理
    3.實驗試劑
    4.實驗儀器
    5.實驗步驟
    6.注意事項
    7.擴展
    8.思考題
    實驗15 熒光顯微鏡檢測
    1.實驗目的
    2.實驗原理
    3.實驗試劑
    4.實驗儀器
    5.實驗步驟
    6.注意事項
    7.擴展
    8.思考題
    參考文獻
    附錄
    1.氨基酸密碼子表
    2.酶切位點保護堿基表
    3.SDS-PAGE分離膠配方表
    4.SDS-PAGE濃縮膠配方表
    5.網絡資源

      編輯
        殷武編著的《基因工程實驗(AnnexinV-EGFP重組蛋白質的克隆表達與檢測)》以具體的ANNEXINV-EGFP(ANNEXINV綠色熒光蛋白)為例繫統介紹基因工程中從基因克隆、鋻定、表達與純化的一繫列實驗。讓學生對基因工程實驗過程有更為繫統與全面的認識,激發學生學習基因工程的興趣,並掌握基因工程中基本的知識與技能。

      摘要
    章AnnexinⅤ-EGFP基因克隆與表達載體構建
    實驗1AnnexinⅤ表達序列檢索
    1.實驗目的
    學會使用Pubmed作界面從Genebank中獲取AnnexinⅤmRNA序列,並利用DNAman① 等軟件對其mRNA序行分析,獲取cDNA序列,利用引物設計軟件設計擴增該cDNA的PCR引物。
    2.實驗原理
    Annexins是一類結構與功能相似的蛋白家族,到目前為止,已經發現該家族至少包含13種蛋白質,其相應結構也已經解析。Annexins家族蛋白通常含有4個同源重復氨基酸序列,每個同源序列約70個氨基酸,此外,該家族蛋白還包含1個特征性的高度保守的鈣離子與磷脂結合域。雖然Annexins蛋白高度同源,但其蛋白質N端的長度和序列變異較大(11~196個氨基酸不等),是發生多種蛋白質翻譯後修飾的主要區域。
    個三維結構被解析的Annexins家族蛋白是人AnnexinⅤ(1990年),其結構如圖1-1所示。根據圓二定律,AnnexinⅤ結構幾乎全部由α螺旋構成,這些螺旋結構
    圖1-1AnnexinⅤ蛋白質結構示意圖
    ①DNAman(5.2.2)是由LynnonBiosoft公司開發的DNA分析軟件,該軟件功能較強,行日常的DNA序列、蛋白質序列分析等。
    根據同源性分別折疊成4個結構緊密的結構域(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ)。每個結構域包含5個α螺旋,相互纏繞形成不多於2個轉向的超螺旋結構。每個結構域中4個α螺旋呈同方向或反方向平行分布,另外1個α螺旋呈垂直分布。結構域Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ依靠短肽相互聯結。這4個結構域幾乎呈環形排列,使該分子呈現局部凹凸的形狀。鈣離子通常結合於該蛋白質的凸面,而蛋白質N端或C端通常分布於相反的凹面。
    AnnexinⅤ基因編碼的蛋白質是Annexin家族蛋白之一,該蛋白質是鈣依賴型磷脂結合蛋白,其中有些成員參與細胞膜相關的內吞與外排途徑。AnnexinⅤ是磷脂酶A2與蛋白激酶C蛋白,具有鈣通道活性與細胞信號傳導作用,在炎癥、生長與分化過程中發揮重要作用。AnnexinⅤ也被稱為胎盤抗凝蛋白Ⅰ、抗血栓素α、內連素Ⅱ、脂皮質素Ⅴ、胎盤蛋白4、錨連蛋白CⅡ。該基因長29kb,包含13個外顯子,編碼一約1.6kb長的單轉錄本,分子質量約35kDa。
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