《細胞工程技術/高職高專生物技術類專業繫列規劃教材》繫統地介紹了細胞工程的相關理論、基本技術和應用等方面內容。全書共分為12個章節，主要包括概述、細胞工程實驗室的組成及實驗基本操作技術、植物組織和細胞培養、植物原生質體培養和體細胞雜交、植物花藥和花粉培養、植物胚胎培養和人工種子、植物種質資源的保存、動物細胞培養所需的基本條件、動物細胞培養技術、動物細胞融合和雜交瘤技術、細胞重組及動物克隆技術、干細胞技術及實訓部分，各部分在依循繫統性的同時，兼備科學性、先進性和實用性，各章附有思考題以便於讀者自學和掌握有關內容。
《細胞工程技術/高職高專生物技術類專業繫列規劃教材》既可供高職高專農林院校生物工程、生物技術、動物藥學、園林技術等相關專業學生使用，也可作為相關專業教師和科技人員的參考書。

第1章 緒論
1.1 細胞工程的學習內容和任務
1.2 細胞工程與其他現代生物技術的關繫
1.3 細胞工程的發展簡史
本章小結
復習思考題

第2章 細胞工程實驗室及實驗基本操作技術
2.1 實驗室及儀器設備
2.2 細胞工程基本操作技術
本章小結
復習思考題

第3章 植物組織和細胞培養
3.1 植物組織與細胞培養原理
3.2 植物離體無性繁殖
3.3 無病毒植物培養
3.4 植物細胞培養
3.5 植物突變體的獲得
本章小結
復習思考題

第4章 植物原生質體培養和體細胞雜交
4.1 植物原生質體培養和體細胞雜交的概念及意義
4.2 植物原生質體分離
4.3 植物原生質體培養
4.4 植物體細胞雜交
本章小結
復習思考題

第5章 植物花藥和花粉培養
5.1 花藥培養的基本概念
5.2 培養材料的選取與制備
5.3 植株再生
5.4 單倍體植株鋻定和染色體加倍
本章小結
復習思考題

第6章 植物胚胎培養和人工種子
6.1 植物胚胎培養的概念和應用
6.2 植物胚培養
6.3 植物胚乳培養
6.4 植物胚珠和子房培養
6.5 植物離體授粉受精
6.6 人工種子
本章小結
復習思考題

第7章 植物種質資源的保存
7.1 植物種質資源保存類型
7.2 試管保存
7.3 超低溫保存
本章小結
復習思考題

第8章 動物細胞培養所需的基本條件
8.1 動物細胞培養基的組成和制備
8.2 影響動物細胞培養的環境因素
本章小結
復習思考題

第9章 動物細胞培養技術
9.1 原代培養
9.2 傳代培養
9.3 細胞繫與細胞克隆
9.4 動物細胞的大規模離體培養技術
9.5 動物細胞的超低溫保存技術
本章小結
復習思考題

第10章 動物細胞融合和雜交瘤技術
10.1 動物細胞融合技術
10.2 雜交瘤技術與單克隆抗體生產
本章小結
復習思考題

第11章 細胞重組及動物克隆技術
11.1 細胞重組技術
11.2 細胞核移植技術
11.3 動物克隆技術的意義及展望
本章小結
復習思考題

第12章 干細胞技術
12.1 干細胞概述
12.2 細胞分離純化常用技術
12.3 胚胎干細胞
12.4 成體干細胞
12.5 誘導性多潛能干細胞
本章小結
復習思考題

實訓項目
實訓項目1 器械的清洗與消毒
實訓項目2 細胞培養液的配制（母液的配置、培養基的制備與滅菌）
實訓項目3 培養材料取材與無菌培養技術
實訓項目4 愈傷組織的誘導
實訓項目5 植物細胞懸浮培養及種細胞篩選技術
實訓項目6 雞胚成纖維細胞原代分離培養
實訓項目7 小鼠胚胎成纖維細胞的原代培養
實訓項目8 MDCK細胞（犬腎細胞）的傳代培養
實訓項目9 MDCK細胞的冷凍與復蘇
實訓項目10 磷酸鈣沉澱法介導細胞轉染

參考文獻

8.1.2天然培養
基天然培養基是指來自動物的體液或從組織中分離提取的一類培養基，如血漿、血清、胚胎提取液和水解乳蛋白等。由於天然培養基制作過程復雜、批間差異大，因此逐步被合成培養基所替代。
1）血清
牛血清是細胞培養中用量最大的天然培養基，含有豐富的細胞生長所必需的營養成分，具有極為重要的功能。
（1）牛血清的分類
牛血清分為胎牛血清、新牛血清、小牛血清。胎牛血清應取自剖宮產的胎牛；新牛血清取自出生24h之內的新生牛；小牛血清取自出生10～30d的小牛。顯然，胎牛血清是品質最高的，因為胎牛還未接觸外界，血清中所含的抗體、補體等對細胞有害的成分最少。
（2）血清的主要成分
血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復雜的混合物，主要有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、激素、無機物等。其組成成分尚不完全清楚，且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養條件不同而異。
（3）血清的主要作用
①提供基本營養物質。如氨基酸、維生素、無機物、脂類物質、核酸衍生物等，是細胞生長必需的物質。
②提供激素和各種生長因子。胰島素、腎上腺皮質激素（氫化可的松、地塞米松）、類固醇激素（雌二醇、睪酮、孕酮）等。生長因子如成纖維細胞生長因子、表皮生長因子、血小板生長因子等。
③提供結合蛋白。結合蛋白的作用是攜帶重要的低相對分子質量物質，如清蛋白攜帶維生素、脂肪以及激素等；轉鐵蛋白攜帶鐵。結合蛋白在細胞代謝過程中起著重要作用。
④提供促接觸和伸展因子使細胞貼壁免受機械損傷。
⑤對培養中的細胞起到某些保護作用。有一些細胞，如內皮細胞、骨髓樣細胞可以釋放蛋白酶，血清中含有抗蛋白酶成分，起到中和作用。現在往往有目的地使用血清來終止胰蛋白酶的消化作用。血清蛋白形成了血清的黏度，可以保護細胞免受機械損傷，特別是在懸浮培養攪拌時，黏度起到重要作用。血清還含有一素和離子，它們在代謝解毒中起重要作用。
2）胚胎提取液
胚胎提取液是早期動物細胞培養中使用的天然培養基，能促進細胞的生長增殖。如雞胚提取液，其中含有生長因子、大分子核蛋白和小分子氨基酸等，可刺激細胞生長增殖，幾乎各種組織細胞培養物都可使用。由於合成培養基的廣泛使用，雞胚提取液已很少使用。
3）水解乳蛋白
水解乳蛋白是一種常用的天然培養基。它是乳蛋白經蛋白酶和肽酶混合物水解得到的制品，為一種均勻淡黃色或灰黃色粉末，有潮解性，故常密封保存在陰涼干燥處。其水溶液呈弱酸性，不溶於醇或醚。4g/L濃度的水解乳蛋白經分解後幾乎與人血漿中氨基酸成分相當，在此培養基中再加入血清，可培養多種細胞。
8.1.3合成細胞培養基
天然培養基的來源是有限的，要進行大量體外細胞培養時，應選用人工合成的各種化學物質配制而成的、又利於細胞生長的培養基。它是在平衡鹽溶液中加入標準的化學營養物質而構成的培養基。1951年Earle首先研制成功合成培養基後，目前合成培養基多達10餘種，如TC199、DMEM、RPMI1640、HAMF12、NCT109等商品化的產品。
1）合成培養基的優點
①合成培養基是用已知成分配制，便於調整和控制實驗設計並使培養條件標準化。
②可以精密地測定培養的細胞與培養液內物質變化情況，用生化定量的方法可以分析各種組織以及各種實驗條件下不同組織細胞的生長和代謝，這也可提供和篩選更加有利於細胞生長的更趨簡化的培養基。
③用人工培養液培養的細胞比較透明清楚，胞質內的顆粒很少，換液時間可適當延長，從而人力、物力。
④合成培養基克服了天然培養基中可能潛在病毒污染的缺點，有利於培養和研究病毒。
⑤合成培養基成分便於儲存和大量配制，利於細胞大規模生產。
2）合成培養基的成分
合成培養基的基本成分主要包括4大類物質：無機鹽、氨基酸、維生素和碳水化合物。在目前常用的培養基中，葡萄糖和谷胺酰胺是體外培養動物細胞的主要能源。除了以上與細胞生長有關的物質以外，培養基中一般還要加入酚紅（當溶液pH小於6.8時呈黃色；當溶液pH大於8.4時呈紅色），以利於觀察培養過程中溶液酸堿度的變化情況。
3）培養基的選擇
選擇培養基沒有固定的標準，但有以下幾點注意事項：
①建立某種細胞株所用的培養基應該是培養這種細胞首選的培養基。可以查閱參考文獻，或在購買細胞株時咨詢。
②可參照其他實驗室慣用的培養基，許多培養基可以適合多種細胞。
③根據細胞株的特點、實驗的需要來選擇培養基。如小鼠細胞株多選RPMI1640。
上述這些培養基仍是基本培養基，配制細胞生長培養基時，根據各種細胞培養的需要，在配制人工合成培養基時，尚需加入一定量的天然合成培養液，構成最適合細胞生長的培養液，加入適量血清的生長液就是其中的一種。這種培養液主要為細胞生長增殖之用，所含血清比例較大。
4）干粉培養基的配制
配制時應注意以下問題：
①認真閱讀說明書。說明書都注明干粉不包含的成分，常見的有NaHC03、谷氨酰胺、丙酮酸鈉、HEPES等。這些成分有些是必須添加的，如NaHC03、谷氨酰胺，有些根據實驗需要決定。
②配制足要保證充分溶解，NaHC03.谷氨酰胺等物質都要等培養基完全溶解後再添加。
③配制好的培養基應立即過濾除菌，無菌保存於4℃冰箱中。
……