●第一章 適合重組蛋白表達的哺乳動物細胞1
第一節 CHO細胞表達繫統3
一、CHO細胞歷史與分類3
二、CHO細胞表達繫統的優點10
三、CHO細胞培養13
第二節 HEK293細胞表達繫統17
一、HEK293細胞的分類與優點17
二、HEK293細胞培養與鋻定19
第三節 其他哺乳動物細胞21
一、人源化細胞繫21
二、非人源化細胞繫23
參考文獻24
第二章 基因工程28
第一節 基因工程簡介28
一、基因工程概念28
二、基因工程的發展史29
三、基因工程的應用和基因工程醫藥的前景32
第二節 哺乳動物細胞基因工程35
一、目的基因獲取36
二、載體繫統37
三、DNA的體外重組45
四、重組DNA的轉化49
五、重組DNA的篩選與鋻定49
六、目的基因的表達50
參考文獻52
第三章 載體工程55
第一節 表件的優化56
一、啟動子56
二、增強子66
三、多聚腺苷酸尾67
四、內含子67
五、內部核糖體進入位點和F2A68
六、選擇標記69
七、翻譯與分泌優化69
第二節 染色件71
一、核基質附著區72
二、遍在染色件75
三、絕緣子75
四、穩定件76
第三節 靶基因整合77
一、位點特異性重組繫統77
二、基於核酸酶和DNA修復途徑的位點特異性整合79
第四節 非靶向轉基因整合80
一、轉座子80
二、慢病毒載體80
參考文獻81
第四章 轉染與篩選87
第一節 細胞轉染87
一、細胞轉染的原理87
二、細胞轉染方法88
第二節 細胞轉染後的篩選93
一、瞬時轉染與穩定轉染93
二、穩定細胞繫的篩選94
三、CHO細胞加壓篩選99
四、HEK293細胞表達繫統102
參考文獻106
第五章 基因組編輯與細胞工程108
第一節 基因組編輯技術109
一、概念109
二、常用的基因組編輯技術109
第二節 CRISPR/Cas9技術在哺乳動物細胞中的應用117
一、基因的破壞119
二、位點特異性基因整合120
三、基因激活或抑制120
四、基因組水平目的基因敲除的篩選121
五、基因編輯應用實驗設計121
六、脫靶分析124
第三節 CHO細胞工程125
一、目的基因126
二、細胞工程常用技術131
三、抗凋亡工程134
四、代謝工程調控135
五、細胞骨架與細胞周期工程136
六、蛋白質翻譯後修飾工程136
七、蛋白質合成工程138
參考文獻139
第六章 動物細胞培養基及其優化144
第一節 細胞培養基145
一、細胞培養基簡介145
二、動物細胞培養基的分類146
三、細胞培養基的相關政策與標準151
四、細胞培養基的主要成分162
五、細胞培養基的理化性質170
六、細胞培養基的滅菌及儲存171
七、細胞培養基的配制173
第二節 CHO細胞培養基177
一、CHO細胞培養基概況177
二、CHO細胞無血清培養基的成分組成及優化179
第三節 其他細胞繫培養基182
一、HEK293細胞繫培養基182
二、HeLa細胞繫培養基183
參考文獻184
第七章 培養工藝與大規模培養188
第一節 動物細胞大規模培養參數189
一、溫度189
二、通氣189
三、pH190
四、滲透壓190
五、攪拌190
六、防止污染190
第二節 動物細胞大規模培養191
一、動物細胞大規模培養反應器191
二、動物細胞大規模培養操作方式194
參考文獻231
第八章 哺乳動物細胞重組蛋白的分離及純化234
第一節 重組蛋白樣品的預處理234
一、透析法235
二、超濾法235
三、冷凍干燥法236
四、雙水相萃取法236
第二節 重組蛋白分離純化的原理及方法237
一、蛋白質沉澱237
二、親和色譜242
三、高效液相色譜247
四、分子篩色譜254
五、離子交換色譜256
六、其他純化技術267
參考文獻269
第九章 重組蛋白分析與鋻定271
第一節 重組蛋白理化性質分析272
一、重組蛋白的電荷異質性分析272
二、重組蛋白分子量測定275
三、重組蛋白的其他性質277
第二節 重組蛋白定量分析技術278
一、標準定量法279
二、比色分析法280
三、紫外吸收法282
四、ELISA測定282
五、蛋白質印跡法283
第三節 空間結構分析283
一、蛋白質的空間結構284
二、X射線衍射晶體分析285
三、核磁共振287
四、生物質譜技術290
參考文獻292
第十章 重組蛋白糖基化修飾與控制295
第一節 糖基化修飾類型及其作用295
一、糖基化及其修飾類型295
二、糖基化修飾的生物學作用297
第二節 重組蛋白糖基化工程及其應用299
一、重組蛋白糖基化工程299
二、重組蛋白糖基化修飾改造策略299
三、重組蛋白糖基化工程的應用301
第三節 重組蛋白糖基化控制302
一、基因組學水平302
二、繫統生物學水平305
三、質量控制與評價306
參考文獻308
第十一章 重組抗體質量控制311
第一節 重組抗體生產細胞的質量控制312
一、建構工程細胞和細胞庫312
二、細胞質控313
第二節 重組抗體的質控標準物質313
一、理化對照品的結構驗證313
二、活性標準品的協作標定314
第三節 重組抗體生產產品的質量控制315
一、產品質量一致性分析315
二、生物學活性測定317
三、蛋白質含量及純度測定318
四、殘留雜質分析319
五、安全性和其他檢測項目319
第四節 重組抗體生產實例——質量屬性評價319
一、還原型毛細管凝膠電泳測定重組抗體的純度及雜質319
二、分子排阻高效液相色譜測定重組抗體的純度及雜質319
三、分子排阻色譜分離靜態光散射測定聚體的分子量320
四、成像毛細管等電聚焦電泳檢測電荷異質性320
五、圓二色譜分析抗體分子的結構320
參考文獻321
第十二章 重組蛋白藥物的研究開發與管理322
第一節 重組蛋白藥物研究開發的一般過程322
一、上遊研究323
二、中試研究324
三、臨床前研究326
四、臨床研究328
五、新藥臨床研究與生產的申報和審批330
第二節 重組蛋白藥物研究開發的相關法規333
一、重組蛋白技術產品研究開發相關法規的主要內容333
二、研發各個環節 的質量管理規範337
第三節 重組蛋白技術產品的生物安全問題339
一、重組蛋白技術產品及其產品生物安全問題的範圍340
二、重組蛋白技術產品及其產品生物安全問題的預防和控制341
三、生物安全性評價342
參考文獻344
附錄 中英文詞彙表347

《哺乳動物細胞重組蛋白工程》圍繞建立哺乳動物細胞高效表達體繫所需的關鍵技術，從哺乳動物細胞、基因工程、載體工程、細胞工程、培養基優化、培養工藝和重組蛋白的分離及純化、分析鋻定、重組蛋白糖基化修飾與控制、重組抗體高效表達與質量控制以及重組蛋白技術產品的研究開發與管理等方面詳細介紹了哺乳動物細胞重組蛋白工程相關的理論和技術。本書內容反映了近十年來哺乳動物細胞重組蛋白工程領域的近期新進展，可作為生物制藥相關專業本科生、研究生及從事生物制藥的廣大科研工作人員的參考用書。

王天雲 等 著