章適合重組蛋白表達的哺乳動物細胞                    1

節CHO細胞表達繫統                                          3

一、CHO細胞歷史與分類                                        3

二、CHO細胞表達繫統的優點                                    10

三、CHO細胞培養                                              13

第二節HEK293細胞表達繫統                                      17

一、HEK293細胞的分類與優點                                  17

二、HEK293細胞培養與鋻定                                    19

第三節其他哺乳動物細胞                                          21

一、人源化細胞繫                                              21

二、非人源化細胞繫                                            23

參考文獻                                                          24



第二章基因工程                                        28

節基因工程簡介                                              28

一、基因工程概念                                              28

二、基因工程的發展史                                          29

三、基因工程的應用和基因工程醫藥的前景                        32

第二節哺乳動物細胞基因工程                                      35

一、目的基因獲取                                              36

二、載體繫統                                                  37

三、DNA的體外重組                                          45

四、重組DNA的轉化                                          49

五、重組DNA的篩選與鋻定                                    49

六、目的基因的表達                                            50

參考文獻                                                          52



第三章載體工程                                        55

節表件的優化                                        56

一、啟動子                                                    56

二、增強子                                                    66

三、多聚腺苷酸尾                                              67

四、內含子                                                    67

五、內部核糖體進入位點和F2A                                  68

六、選擇標記                                                  69

七、翻譯與分泌優化                                            69

第二節染色件                                            71

一、核基質附著區                                              72

二、遍在染色件                                        75

三、絕緣子                                                    75

四、穩定件                                            76

第三節靶基因整合                                                77

一、位點特異性重組繫統                                        77

二、基於核酸酶和DNA修復途徑的位點特異性整合                79

第四節非靶向轉基因整合                                          80

一、轉座子                                                    80

二、慢病毒載體                                                80

參考文獻                                                          81



第四章轉染與篩選                                      87

節細胞轉染                                                  87

一、細胞轉染的原理                                            87

二、細胞轉染方法                                              88

第二節細胞轉染後的篩選                                          93

一、瞬時轉染與穩定轉染                                        93

二、穩定細胞繫的篩選                                          94

三、CHO細胞加壓篩選                                          99

四、HEK293細胞表達繫統                                      102

參考文獻                                                          106



第五章基因組編輯與細胞工程                            108

節基因組編輯技術                                            109

一、概念                                                      109

二、常用的基因組編輯技術                                      109

第二節CRISPR/Cas9技術在哺乳動物細胞中的應用                  117

一、基因的破壞                                                119

二、位點特異性基因整合                                        120

三、基因激活或抑制                                            120

四、基因組水平目的基因敲除的篩選                              121

五、基因編輯應用實驗設計                                      121

六、脫靶分析                                                  124

第三節CHO細胞工程                                            125

一、目的基因                                                  126

二、細胞工程常用技術                                          131




字數限制，僅顯示部分目錄。

基因工程技術誕生早期，重組蛋白生產主要以原核細胞為主，後期逐漸發展起來酵母、昆蟲等表達繫統，但這些表達繫統都由於缺乏人類細胞的翻譯後修飾，不適合表達結構復雜的大分子蛋白。因此，哺乳動物細胞表達繫統是目前重組蛋白藥物生產的重要平臺，並且越來越成為重組蛋白的主要表達繫統。

近三十年特別是近十年來，科研工作者圍繞哺乳動物細胞表達繫統重組蛋白表達做了大量卓有成效的工作，克服了哺乳動物細胞重組蛋白表達量低、表達不穩定等問題，重組蛋白的產量和質量都有了大幅度提高，重組抗體表達量已經達到克級水平。

為了適應國內哺乳動物細胞表達重組蛋白的迅猛發展及其教學、科研的需要，在長期的科研中，我們不斷積累總結經驗並歸納提煉，在閱讀大量國內外文獻的基礎上，編著了這本《哺乳動物細胞重組蛋白工程》。全書共分十二章，主要內容包括哺乳動物細胞、基因工程、載體工程、細胞工程、培養基優化、培養工藝、分離與純化、分析鋻定及重組蛋白技術產品的研究開發與管理、重組蛋白糖基化修飾與控制及重組抗體高效表達與質量控制等內容。

為了方便讀者閱讀，本書盡可能減少專業術語，力求做到通俗易懂；為了保證理論和技術的前沿性，次出現的專業術語都進行了英文注釋，並且書後附有中英文詞彙表；為便於讀者了解國內外近期的發展動態，每章附有引自國內外不同學者近期的重要文獻。

本書可作為生物制藥相關專業本科生、研究生及從事生物制藥的廣大科研工作人員的參考用書。參加本書撰寫的人員來自河南省重組藥物蛋白表達繫統國際合作實驗室、新鄉醫學院從事重組蛋白表達科研一線的科研人員，他們具有多年的哺乳動物細胞重組蛋白表達的科研工作經驗，為本書編寫投入了大量的精力。另外，化學工業出版社在編輯加工中做了大量細致的工作，在此對他們表示衷心感謝！

寫作是一項十分復雜而繁重的工作，盡管每位著者都為本書付出了辛勤勞動，但是由於著者水平有限，書中難免有疏漏和不足，敬請讀者提出寶貴意見，以便再版時改正。



2020年3月於新鄉醫學院  王天雲