了得網醫學_褪黑激素聯合脂肪源性干細胞治療犬坐骨神經損傷

內容簡介

本書全面深入地介紹了褪黑激素聯合脂肪源性干細胞對犬坐骨神經損傷的治療效果。本書分為五章。第1章重點介紹了周圍神經損傷和再生的特點、組織工程神經的應用，尤其對組織工程神經中種子細胞的選擇作了較詳細闡述；第2章較詳細介紹了褪黑激素的生物學效應以及對干細胞增殖和分化的影響；第3章重點闡述了犬脂肪源性干細胞的分離、培養以及鋻定方法，包括試劑的準備和配制、基本的培養技術和要求；第4章全面繫統地介紹了褪黑激素對犬脂肪源性干細胞體外增殖的影響，並對其機制進行了研究；第5章繫統評價了褪黑激素和脂肪源性干細胞聯合移植治療犬坐骨神經損傷的效果，證實了褪黑激素對犬脂肪源性干細胞移植治療外周神經損傷的促進作用。本書為臨床犬外周神經損傷的治療提供了新方法，具有一定的臨床實踐意義。

作者簡介

無

第1章周圍神經的損傷與修復
1.周圍神經損傷和再生的特點3
1.1周圍神經損傷的特點3
1.2周圍神經損傷的類型4
1.3周圍神經損傷的病理變化5
1.4周圍神經損傷的表現6
1.5周圍神經再生的特點7
2.周圍神經損傷的治療10
2.1自體神經移植10
2.2同種異體神經移植11
2.3組織工程化神經移植12
第2章褪黑激素與干細胞
1.褪黑激素的分泌合成與代謝29
1.1褪黑激素的來源和分泌29
1.2褪黑激素的合成與代謝30
1.3褪黑激素的受體類型及其分布特點32
2.褪黑激素的生物學作用36
2.1褪黑激素對時差與睡眠的影響36
2.2褪黑激素對免疫功能的影響36
2.3褪黑激素抗腫瘤作用38
2.4褪黑激素抗氧化和抗衰老作用39
2.5褪黑激素對繁殖繫統的調節40
2.6褪黑激素對干細胞增殖與分化的調控作用41
第3章犬脂肪源性干細胞體外分離培養及鋻定
1.實驗材料51
1.1實驗試劑51
1.2實驗設備52
1.3主要試劑配制53
1.4實驗動物55
2.實驗方法55
2.1脂肪源性干細胞的分離與培養55
2.2脂肪源性干細胞多向誘導分化56
2.3脂肪源性干細胞表面marker的檢測57
3.實驗結果57
3.1犬脂肪源性干細胞體外培養的形態學觀察57
3.2犬脂肪源性干細胞的多向分化能力59
3.3犬脂肪源性干細胞表面marker的鋻定61
4.討論63
第4章褪黑激素對脂肪源性干細胞增殖的影響
1.實驗材料69
1.1實驗試劑69
1.2實驗設備70
1.3主要試劑配制70
2.實驗方法71
2.1褪黑激素對脂肪源性干細胞增殖的影響71
2.2褪黑激素受體阻斷劑對脂肪源性干細胞增殖的影響72
2.3ERK1/2通路阻斷劑對褪黑激素介導脂肪源性干細胞增殖的影響73
2.4數據分析74
3.實驗結果74
3.1不同濃度褪黑激素對脂肪源性干細胞體外增殖的影響74
3.2兩種褪黑激素受體阻斷劑對褪黑激素介導脂肪源性干細胞增殖的影響75
3.3MTT法檢測ERK1/2通路阻斷劑PD98059對脂肪源性干細胞活性的影響76
4.討論77
第5章脂肪源性干細胞聯合褪黑激素對犬坐骨神經損傷修復的評價
1.實驗材料83
1.1實驗試劑83
1.2實驗設備84
1.3實驗試劑配制84
1.4實驗動物86
2.實驗方法86
2.1脂肪源性干細胞的培養86
2.2組織工程神經移植物的制備86
2.3犬坐骨神經缺損修復的實驗分組87
2.4犬坐骨神經缺損的修復87
2.5動物行為學觀察88
2.6辣根過氧化物酶（HRP）逆行示蹤實驗88
2.7組織學檢查90
2.8腓腸肌檢測90
2.9神經電生理檢測91
2.10統計學處理92
3.實驗結果92
3.1動物模型建立92
3.2術後實驗動物行為學觀察92
3.3HRP逆行示蹤檢測結果97
3.4神經纖維再生檢測99
3.5腓腸肌恢復結果102
3.6神經電生理檢測105
4.討論105
參考文獻

前言

隨著人們生活水平的提高，飼養名貴犬的家庭越來越多。然而，外傷、骨折、腫瘤等均可引起犬坐骨神經損傷，並且缺損後的神經生長速度慢、效應器和感受器萎縮快，因此周圍神經損傷後的再生和修復就成為獸醫臨床的研究熱點。近年來，組織工程技術的迅速發展為周圍神經的修復帶來了新的希望，其中理想種子細胞的獲得是構建組織工程神經的前提和基礎。脂肪源性干細胞（Adipose stem cells，ADSCs）是具有多向分化潛能的成體干細胞，在特定環境下可以向雪旺細胞（Schwann cells，SCs）分化，同時，脂肪源性干細胞還具有來源廣泛、取材簡便、並發癥少、增殖速度快、擴增穩定等優點，因此常作為種子細胞來修復損傷的外周神經。但是損傷組織處的微環境含氧量和pH值均較低，易造成移植的干細胞發生凋亡。因此，脂肪源性干細胞在體內有效增殖是提高其修復能力的關鍵。褪黑激素（Melatonin，Mel）是松果體內合成的一種吲哚類激素，參與調控機體的晝夜節律、改善睡眠質量，具有抑制腫瘤生長、抗氧化和抗細胞凋亡等廣泛的生物學效應。研究證實，褪黑激素對干細胞增殖和分化具有重要的調控作用。本書首先研究了褪黑激素對犬脂肪源性干細胞增殖的影響，隨後將褪黑激素孵育的脂肪源性干細胞復合神經支架移植入犬坐骨神經缺損處，3個月後檢測了犬坐骨神經損傷後的修復效果。本書的實驗內容受到國家自然科學基金（No.U1504325）的資助，整個實驗分為犬脂肪源性干細胞的分離培養與鋻定、褪黑激素對脂肪源性干細胞增殖的影響、脂肪源性干細胞聯合褪黑激素對犬坐骨神經損傷修復的評價。
綜上所述，褪黑激素能夠促進犬脂肪源性干細胞的增殖，且該作用是褪黑激素通過MT1受體激活ERK信號通路來發揮；褪黑激素對脂肪源性干細胞移植修復犬坐骨神經損傷具有明顯的促進作用。因此，獸醫臨床上治療犬坐骨神經損傷時，可以考慮移植的種子細胞——脂肪源性干細胞用褪黑激素進行孵育。本書為犬坐骨神經損傷的治療提供了實驗依據。
特別感謝張自強博士在實驗設計、圖片加工處理等方面提供的幫助。感謝研究生黃婷婷同學在實驗實施過程中所作的貢獻，感謝潘麗同學對書稿的認真校對；感謝鄧雯教授對本書的指導，感謝呂瓊霞、陳曉光、朱雪敏、位蘭博士對實驗實施提供的幫助。
限於筆者水平，書中難免有不足之處，懇請讀者對本書提出批評和改進意見。

著者
2017年2月

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