項目一免疫技術基礎技能訓練1



項目介紹1



學習指南1



一、項目準備1



（一）知識準備1



（二）技能準備11



二、項目實施18



任務一識別人體免疫器官和免疫細胞發育過程18



任務二動物注射和采集血液18



任務三分離T淋巴細胞、B淋巴細胞23



三、項目拓展24



要點解讀26



項目思考27



項目二大腸杆菌E.coli抗原的制備28



項目介紹28



學習指南28



一、項目準備28



（一）知識準備28



（二）技能準備36



二、項目實施39



任務一大腸杆菌E.coli外膜蛋白OMP抗原的制備39



任務二大腸杆菌E.coli脂多糖LPS的制備40



三、項目拓展42



（一）細胞性免疫原的制備42



（二）佐劑的使用方法42



要點解讀43



項目思考45



項目三免疫血清的制備46



項目介紹46



學習指南46



一、項目準備46



（一）知識準備46



（二）技能準備55



二、項目實施58



任務一抗傷寒杆菌血清的制備58



任務二抗綿羊紅細胞血清的制備（溶血素的制備）60



任務三抗人血清抗體的制備61



三、項目拓展61



（一）免疫球蛋白基因的結構和抗體多樣性61



（二）人類免疫球蛋白的主要理化性質和生物學特性比較64



（三）免疫應答65



（四）免疫耐受69



要點解讀70



項目思考71



項目四抗原抗體反應的臨床檢驗73



項目介紹73



學習指南73



一、項目準備74



（一）知識準備74



（二）技能準備81



二、項目實施89



任務一ABO血型鋻定89



任務二玻片凝集反應檢測未知細菌90



任務三布氏杆菌病平板凝集反應91



任務四環狀沉澱反應測定血清效價92



任務五單向瓊脂擴散檢測人血清中的免疫球蛋白93



任務六雙向瓊脂擴散試驗檢測未知細菌94



任務七免疫電泳實驗檢測抗原96



任務八對流免疫電泳檢測人血清97



任務九火箭電泳試驗檢驗血清中抗原的含量98



三、項目拓展99



（一）血型的概念99



（二）血型的種類99



（三）ABO血型繫統的遺傳101



（四）相容的血型101



要點解讀102



項目思考103



項目五血清中補體的檢測105



項目介紹105



學習指南105



一、項目準備105



（一）知識準備105



（二）技能準備116



二、項目實施118



任務一觀察溶血反應118



任務二補體結合實驗119



任務三血清總補體溶血活性(CH50)測定121



任務四透射比濁法測定血清C3含量122



三、項目拓展123



（一）補體C4溶血活性的測定(試管法)123



（二）補體介導的細胞毒試驗123



要點解讀125



項目思考125



項目六免疫標記技術檢測植物病毒127



項目介紹127



學習指南127



一、項目準備127



（一）知識準備127



（二）技能準備134



二、項目實施135



任務一酶標抗體（抗原）的制備135



任務二雙抗體夾心法診斷植物病毒137



任務三直接免疫熒光法測抗原139



任務四間接免疫熒光法測抗體140



三、項目拓展141



（一）過氧化物酶-抗過氧化物酶復合物制備技術141



（二）McAb-PAP制備技術141



（三）堿性磷酸酶標記抗體制備技術142



（四）堿性磷酸酶-抗堿性磷酸酶復合物制備技術142



（五）熒光免疫檢測補體結合法142



（六）熒光免疫檢測雙標記法143



（七）熒光免疫標記技術應用143



（八）化學發光免疫標記技術143



要點解讀145



項目思考146



項目七雞胚流感疫苗的制備147



項目介紹147



學習指南147



一、項目準備147



（一）知識準備147



（二）技能準備151



二、項目實施153



任務雞胚流感疫苗的制備153



（一）雞胚流感疫苗簡介153



（二）雞胚流感疫苗制備154



三、項目拓展155



（一）其他流感滅活疫苗155



（二）人工主動免疫156



（三）細菌類疫苗157



要點解讀160



項目思考162



項目八人體免疫球蛋白的制備163



項目介紹163



學習指南163



一、項目準備163



（一）知識準備163



（二）技能準備165



二、項目實施168



任務一Cohn法制備人體免疫球蛋白168



（一）Cohn法制備人體免疫球蛋白簡介168



（二）人體免疫球蛋白制備168



任務二牛血清免疫球蛋白的制備170



三、項目拓展172



（一）蛋白質純化方法172



（二）透析袋的處理方法173



要點解讀173



項目思考174



項目九金標免疫診斷試劑盒的制備175



項目介紹175



學習指南175



一、項目準備175



（一）知識準備175



（二）技能準備176



二、項目實施178



任務一膠體金的制備178



任務二膠體金標記蛋白的制備181



任務三膠體金診斷試劑盒的制備182



三、項目拓展183



（一）診斷試劑183



（二）酶聯免疫吸附診斷試劑盒生產工藝183



（三）PCR診斷試劑生產工藝183



要點解讀184



項目思考184



附錄相關藥品管理法律法規186



一、凍干靜注人免疫球蛋白(pH4)186



二、A群腦膜炎球菌多糖疫苗189



三、皮內注射用卡介苗193



四、凍干人用狂犬病疫苗（Vero細胞）197



五、重組乙型肝炎疫苗（釀酒酵母）201



六、流感全病毒滅活疫苗205



七、脊髓灰質炎減毒活疫苗糖丸(人二倍體細胞）209



八、凍干肉毒抗毒素214



九、抗眼鏡蛇毒血清217



十、抗人T細胞兔免疫球蛋白220



十一、乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑盒(酶聯免疫法）224



十二、人類免疫缺陷病毒抗體診斷試劑盒（酶聯免疫法）226



參考文獻229

前言



免疫技術作為現代生命科學研究的三大前沿技術之一，廣泛應用在生物學研究、臨床醫學檢驗、生物制品等各個領域，是生物技術應用專業、生物工程專業和臨床醫學專業學生必修的一門專業課程，也是學生從業後應用的主要技術之一。生物技術的飛速發展帶動了對生物及相關專業高職高專層次學生的需求，從而形成了對高品質免疫技術教材的需求。但是，目前關於免疫的書籍大部分是介紹免疫學基礎知識的，從免疫技術相關崗位出發、綜合講解免疫技術的教材還較少，且大都是針對本科層次編寫的。本教材版出版後受到廣大師生的歡迎，根據用書師生反饋和行業、專業發展要求，編者們開展了對《免疫技術》版教材的修訂編寫工作。



修訂工作依據免疫產品生產和免疫檢驗相關崗位對免疫技術知識和技能的要求，結合高職高專基於工作過程的課程體繫改革的實踐，從實際產品和技術出發，構建了“適度、夠用”的繫統理論知識和技能體繫。修訂工作的重點集中在以下幾方面：



其一，以企業人纔崗位需求為依托，保證教材的“行業性和先進性”，調整教學項目和項目載體。



修訂教材共九個項目，對原有教材的教學項目和項目載體進行了調整，如：將項目四——凝集反應檢測ABO血型和項目五——沉澱反應檢測血清效價合並為項目四——抗原抗體反應的臨床檢驗；根據臨床檢驗的發展，增加項目五——血清中補體的檢測；將項目六——酶聯免疫吸附試驗檢測植物病毒和項目七——熒光免疫檢測豬瘟病毒合並為項目六——免疫標記技術檢測植物病毒。這樣更有利於學生對免疫技術整體知識體繫的構建，為學生今後從事免疫技術相關工作夯實理論基礎，培養良好的職業素養、職業意識和使命感。



其二，調整項目內容中編排順序，既兼顧了學生知識體繫構建，又兼顧了基於工作過程的學生認知規律。原有教材編寫順序為“項目實施→項目思考→和拓展知識”，在實施過程中查找和拓展知識，掌握知識點比較凌亂。為遵循學生的認知規律，修訂版本編寫順序調整為“項目介紹→學習指南→以分解任務形式實施項目→在項目實施中穿插理論知識→在項目實施後進行項目思考和答疑→項目準備（知識 技能準備）→項目完成後的理論知識拓展→要點解讀中重構項目，形成理實一體化架構體繫”，該教材編寫模式與“教學做一體”的教學模式相輔相成。



其三，配套的《免疫技術》北京市精品課程網站作為數字化平臺支撐，便於學生課下自主學習。為方便學生在線學習，拓展學生專業學習路徑，加強師生交流，《免疫技術》建設了內容豐富的網絡課程，該課程獲評為2008年北京市精品課程。



其四，從學生出發，以學生為中心，提升教材的可閱讀性，增加了細節處理。修訂版本中增加了細節內容，如：學習目標中增加了介紹學習方法；增加了要點解讀，提示學生難點和重點，幫助學生理解；增加了“知識體繫構建”形成的知識體繫圖和專業詞彙中英文對照。這些細節處理，能幫助學生更好地理解和掌握所學知識。



修訂版教材由北京電子科技職業學院王曉傑和張虎成任主編，全書分為9個項目，按照由簡單到復雜、由單項到綜合的層次排布，包括項目一免疫技術基礎技能訓練、項目二大腸杆菌E.coli抗原的制備、項目三免疫血清的制備、項目四抗原抗體反應的臨床檢驗、項目五血清中補體的檢測、項目六免疫標記技術檢測植物病毒、項目七雞胚流感疫苗的制備、項目八人體免疫球蛋白的制備、項目九金標免疫診斷試劑盒的制備。附錄為相關藥品管理法律法規，將針對正文部分的相關法規提供給讀者參考，使讀者更好地理解正文部分的內容。



本書在修訂過程中，得到了化學工業出版社的大力支持和熱情幫助。同時，得到了河南牧業經濟學院李存法、漯河職業技術學院黨衛紅、廣東輕工職業技術學院張鼕青、北京電子科技職業學院金麗華和楊軍、北京賽百泰生物技術有限公司楊春花、北京莊笛浩禾生物醫學科技有限公司李明剛、北京天壇生物制品股份有限公司瀋永纔等各位參編老師們的大力支持配合，使得教材編寫工作完成得愉快、嚴謹和有序。



由於編者的知識和能力有限，在教材編寫中還存在不足之處，敬請同行專家、使用本教材的師生和廣大讀者批評指正。







編者



2018年3月











版前言



免疫技術作為現代生命科學研究的三大前沿領地之一,廣泛應用在生物學研究、臨床醫學檢驗、生物制品等多個領域，是生物技術應用專業和生物工程專業學生必修的一門專業課程和從業後應用的主要技術之一。生物技術飛速發展帶動了對生物技術類專業高職高專層次學生的需求，從而形成了對高品質高職高專免疫技術教材的需求。但是，目前關於免疫的書籍大部分是介紹免疫學基礎知識的，綜合性的、繫統性的、專門講解免疫技術的教材非常少，且教材大都是針對本科高等教育編寫的，本教材就是在這種情況下組織編寫的。



本教材依據免疫產品生產和免疫檢驗相關崗位對免疫技術技能的要求，結合高職高專基於工作過程的課程體繫改革的實踐，從實際產品和技術出發，形成“適度、夠用”的繫統理論知識。



本教材由北京電子科技職業學院教師王曉傑和張虎成共同主編，全書分為十個項目，按照由簡單到復雜、由單項到綜合的層次排布，並分為三個平臺。個平臺為基礎研究平臺，包括項目一免疫技術基礎技能訓練、項目二大腸杆菌E.coli抗原的制備、項目三免疫血清的制備，三個項目集中講解免疫技術的基礎知識和基礎技能。第二個平臺為免疫檢測平臺，包括項目四凝集反應檢測ABO血型、項目五沉澱反應檢測血清效價、項目六酶聯免疫吸附試驗檢測植物病毒、項目七熒光免疫檢測豬瘟病毒、四個項目集中講解免疫檢驗技術。第三個平臺為免疫技術產品平臺，包括項目八雞胚流感疫苗的制備、項目九人體免疫球蛋白的制備、項目十金標免疫診斷試劑盒的制備，三個項目集中講解免疫技術產品的制備。



本書在編寫過程中，得到了化學工業出版社的大力支持和熱情幫助。同時，得到了北京科技職業學院楊春花、漯河職業技術學院黨衛紅、廣東輕工職業技術學院張鼕青、北京吉利大學董志剛、北京電子科技職業學院李雙石、北京莊笛浩禾生物醫學科技有限公司李明剛、北京天壇生物制品股份有限公司瀋永纔、黑龍江農墾職業學院王義軍、鄭州職業技術學院張玲麗、中國科學院微生物研究所胡坤等各位參編老師的積極配合，使得教材編寫工作完成得愉快、嚴謹和有序，在此，對化學工業出版社和參與編寫與評審的各位老師致以誠摯的感謝。



由於編者的知識和能力有限，在教材編寫中難免存在不足之處，敬請廣大同行專家、使用本教材的師生和其他讀者批評指正。







王曉傑  張虎成



2010年5月