伊秉綬喜繪畫、善治印,亦有詩集傳世。工書法,擅諸體,尤精隸書。其書風恬淡渾樸、靜穆高古,與當時流行的館閣體拉開了距離,開清代崇碑書風之先河。康有為曾稱贊他『集分書(隸書)之大成』。
伊秉綬的隸書取法漢碑,成自家面目。其用筆勁健沉著,橫平豎直,中鋒行筆,藏頭護尾,借篆法來寫隸書,筆下省去了典型的『雁尾』式(波挑式)的筆畫,寄精妙於渾樸,寓變化於平直,因此線條靜穆,氣像高古;結體充實寬博,氣勢雄渾,方嚴整飭;章法布白,字字鋪滿,四面撐足,給人莊嚴肅穆的裝飾美感,大有『廟堂之氣』,尤其是大字作品,『愈大愈壯』。其真書、行書取法顏真卿,用筆圓渾自然、筆畫『如屋漏痕』,結字天真稚拙,儀態敦厚,骨氣洞達。沙孟海曾說:『伊秉綬是隸書正宗,康有為說他集分書之大成,很對。其實,他的作品無體不佳,落筆就和別人分出仙凡的境界。』