酶學方法——CRISPR/Cas9、ZFN和TALEN在創建
作 者: (美)J.A.杜德娜(Jennifer A.Doudna),(美)E.J.松特海默爾(Erik J.Sontheimer) 編 朱必鳳 等 譯
定 價: 198
出?版?社: 科學出版社
出版日期: 2019年11月01日
頁 數: 430
裝 幀: 平裝
ISBN: 9787030621887
●章 Cas9的體外酶學
1.1 導論
1.2 Cas9表達和純化
1.3 引導RNA的制備
1.4 內切核酸酶切割分析
1.5 結束語
致謝
參考文獻
第2章 采用CRISPR/Cas核酸酶和縮短的引導RNA在人體細胞中靶向基因組編輯
2.1 導論
2.2 方法
利益衝突
參考文獻
第3章 TALEN、Cas9和其他基因組編輯酶的特異性測定
3.1 導論
3.2 方法
3.3 結論
致謝
參考文獻
第4章 定制重組酶基因組工程
4.1 導論
4.2 靶識別
4.3 重組酶構建
4.4 重組酶活性的測定
4.5 位點特異性整合
4.6 結論
致謝
參考文獻
第5章 人細胞基因組工程
5.1 導論
5.2 人基因組結構
5.3 使用可編程核酸酶對人基因編輯的範圍
5.4 可編程核酸酶用於人細胞基因組編輯
5.5 使用可編程核酸酶對人類遺傳疾病的修復
5.6 使用可編程核酸酶對人非遺傳疾病的治療
5.7 人多能干細胞基因組工程
5.8 可編程核酸酶對人細胞的遞送
5.9 切口酶修飾人基因組
5.10 基因編輯人細胞的富集
5.11 結論
致謝
參考文獻
第6章 人細胞基因組編輯
6.1 導論
6.2 基因打靶策略
6.3 核酸酶靶位點的選擇
6.4 實驗規程
6.5 可供選擇的方法
參考文獻
第7章 活細胞熒光成像技術標記內源性基因位點及使用ZFN、TALEN和Cas9進行分子計算
7.1 導論
7.2 方法
7.3 標記/編輯局限性
7.4 遠景
致謝
參考文獻
第8章 Cas9切口酶基因組編輯
8.1 導論
8.2 靶選擇
8.3 質粒sgRNA構建
8.4 細胞繫sgRNA的驗證
8.5 細胞收獲與DNA提取
8.6 錯配酶法SURVEYOR缺失分析
8.7 使用Cas9n HDR和非HDR插入
8.8 HDR和插入事件的分析
8.9 疑難問題解決
致謝
參考文獻
第9章 DR-GFP報道基因和Cas9核酸酶分析哺乳動物細胞中斷裂和切口誘導同源重組
9.1 導論
9.2 克隆切口酶和Cas9催化死亡變種
9.3 靶位點選擇和sgRNA構建的克隆
9.4 細胞轉染和流式細胞儀分析
9.5 材料
9.6 結論
參考文獻
0章 獲得性CRISPR/Cas9功能基因組篩選
10.1 導論
10.2 高通量篩選載體設計的改良
10.3 sgRNA文庫的構建
10.4 引導文庫逆轉錄病毒的轉導
10.5 關於篩選設計參數的注意事項
10.6 涉及sgRNA文庫池陽性選擇篩選“命中”解碼
10.7 結論
參考文獻
1章 人多能干細胞基因組快速編輯的iCRISPR平臺
11.1 導論
11.2 iCas9hPSC的產生
11.3 用iCRISPR產生敲除hPSC
11.4 用iCRISPR精確改變核苷酸的傳代
11.5 用iCRISPR誘導hPSC基因敲除
11.6 結論和前景
致謝
參考文獻
2章 用Cas9DSB和nCas9配對切口產生人體細胞癌癥易位
12.1 導論
12.2 材料
12.3 誘導和檢測癌癥在人細胞中易位方法
12.4 結論
致謝
參考文獻
3章 人類基因治療的基因組編輯
13.1 導論
13.2 人原代CD4+T細胞B2M的基因組編輯
13.3 用CRISPR/Cas9對人CD34+CCR5中的CCR5打靶
參考文獻
4章 CRISPR/Cas9在大鼠基因組位點特異性突變的產生
14.1 原理
14.2 設備
14.3 材料
14.4 方案
14.5 步：sgRNA靶寡核苷酸體外轉錄
14.6 第2步：Cas9mRNA的體外轉錄
14.7 第3步：假孕雌性大鼠和單細胞大鼠胚胎的制備
14.8 第4步：單細胞胚胎顯微注射和假孕大鼠胚胎移植
14.9 第5步：創建大鼠的鋻定
14.10 第6步：F1代大鼠的產生
參考文獻
5章 單質粒注射在小鼠中CRISPR/Cas9的基因組編輯
15.1 導論
15.2 pX330設計和CRISPR/Cas9質粒構建
15.3 pX330體外驗證
15.4 環形質粒注射一步產生突變小鼠
15.5 打靶突變小鼠的篩選
15.6 結論
致謝
參考文獻
6章 CRISPR/Cas9在活細胞中件成像
16.1 導論
16.2 穩定表達dCas9-GFP細胞繫的產生
16.3 使用慢病毒載體表達sgRNA
16.4 非重復序列的標記
16.5 CRISPR檢測基因組座的成像
16.6 結論
致謝
參考文獻
7章 熱帶爪蟾中基於Cas9基因組編輯
17.1 導論
17.2 原理
17.3 方案
17.4 討論
致謝
參考文獻
8章 斑馬魚中基於Cas9基因組編輯
18.1 導論
18.2 插入/缺失突變的靶向產生
18.3 靶向基因組編輯的其他策略
18.4 前景
致謝
參考文獻
9章 果蠅中基於Cas9基因組編輯
19.1 導論
19.2 基於CRISPR基因組編輯應用和設計考慮
19.3 CRISPR組分的遞送
19.4 CRISPR試劑的配制
19.5 突變子的檢測
致謝
參考文獻
第20章 生殖細胞注射CRISPR/Cas RNA的無轉基因基因組編輯
20.1 理論、哲學和實際問題
20.2 設備
20.3 材料
20.4 靶序列識別
20.5 產生sgRNA構造
20.6 sgRNA的體外合成
20.7 hCas9 mRNA體外合成
20.8 sgRNA和mRNA的注射
20.9 CRISPR/Cas突變產生的恢復
參考文獻
第21章 擬南芥和煙草中Cas9的基因組編輯
21.1 導論
21.2 Cas9和sgRNA的表達
21.3 雙sgRNA引導基因組編輯
21.4 遠景
21.5 注釋
致謝
參考文獻
第22章 工業酵母基因組CRISP工程
22.1 導論
22.2 質粒設計
22.3 Cas9表達
22.4 引導RNA表達
22.5 篩選方法
22.6 結束語
致謝
參考文獻
第23章 Cas9增強功能蛋白質工程
23.1 導論
23.2 方法
23.3 結論
參考文獻
內容簡介
《酶學方法》是覆蓋生命科學各個分支學科的繫列叢書，從搶先發售出版至今，逐漸擴展到生命科學領域各個研究方向的各項前沿技術。該叢書是備受認可並被多次引用的有名工具書，被譽為生物技術實驗領域的金準則，已經成為生命科學領域研究人員基本而推薦的參考資料。
《酶學方法——CRISPR/Cas9、ZFN、TALEN 在創建特異性位點改變基因組中的應用》是《酶學方法》繫列叢書第546卷，作者由世界有名大學和研究機構，包括美國麻省理工學院、美國加利福尼亞大學伯克利分校、美國耶魯大學、荷蘭蘇黎世大學、美國哈佛大學、美國哈佛醫學院、荷蘭阿姆斯特丹大學、加拿大麥吉爾大學、美國斯隆-凱特林研究所、法國國家自然博物館、日本東京大學、美國加利福尼亞大學舊金山分校等的有名科學家組成。《酶學方法——CRISPR/Cas9、ZFN、TALEN 在創建特異性位點改變基因組中的應用》主要介紹目前基因編輯三大前沿技術，重......
