●前言
第一篇生物分子實驗
實驗1動物組織/細胞總RNA的制備及檢測3
實驗2cDNA的反轉錄制備11
實驗3全長基因編碼序列或片段的PCR擴增制備及其半定量PCRl4
實驗4GAPDH基因PCR產物的T載休克隆20
實驗5細菌培養及CaCl2法制備感受態細胞25
實驗6CaCl2轉化法質粒轉化30
實驗7陽性克隆篩選33
實驗8質粒DNA的堿裂解法分離純化43
實驗9T載體克隆的DNA序列分析49
實驗10質粒DNA的酶切及酶切片段的純化56
實驗1lGAPDH基因表達載體構建60
實驗12蛋白表達的SDS-PAGE檢測67
實驗13蛋白表達的Westernblot檢測79
實驗14蛋白表達的ELISA測定91
實驗15蛋白表達的2-DE檢測99
實驗16蛋白原核表達產物的純化110
實驗17蛋白原核表達產物的活性分析115
第二篇細胞組織實驗
實驗18動物細胞培養12l
實驗19細胞凋亡及周期的檢測128
實驗20細胞骨架的觀察138
實驗21細胞染色體標本制備及吉姆薩染色觀察144
實驗22細胞染色體熒光原位雜交15l
實驗23細胞線粒體及線粒體DNA的制備及檢測159
實驗24細胞基因組DNA的制備166
實驗25細胞基因組DNA小衛星多態性的Southernblot檢測173
實驗26細胞基因組D\A微衛星多態性的PCR檢測181
實驗27細胞基因組DNA中SNP的DNA微陣列芯片檢測187
實驗28細胞基因組DNA超聲剪切及高通量DNA測序文庫的制備197
實驗29細胞中基因表達的定量PCR檢測218
實驗30全基因組基因表達的雙色基因芯片分析233
實驗31全基因組基因表達的單色基因芯片分析241
實驗32轉錄組RNA表達的RNA-Seq測定255
實驗33microRNA表達的miRNA-Seq檢測269
實驗34細胞核蛋白的制備及EMSA分析283
實驗35細胞中DNA結合蛋白的ChIP-Seq分析292
實驗36動物組織切片的制備及HE染色309
實驗37組織中蛋白表達的免疫組化檢測314
實驗38組織巾核酸分子的原位雜交檢測327
實驗39組織中核酸分子的原位PCR檢測334
第三篇納米材料實驗
實驗40納米金的制備與表征345
實驗41納米金的DNA標記及檢測349
實驗42量子點的制備357
實驗43熒光量子點的DNA標記及檢測365
實驗44殼聚糖納米粒制備及熒光標記370
實驗45殼聚糖納米粒基因轉移實驗375
實驗46脂質體的制備和表征379
實驗47載藥脂質體的制備和表征382
實驗48磁性納米材料的制備及表征387
實驗49磁性納米材料的細胞氧化應激檢測394
實驗50磁性納米材料的近紅外熒光標記及活體代謝檢測410
附錄告誡419
本書從繫統訓練學生從事生物科學與醫學工程綜合實驗研究技能的角度,繫統編排了50個實驗,構成三個模塊,即生物分子實驗、細胞組織實驗和納米材料實驗。生物分子實驗以生物技術中的基因上程為主線,繫統編排17個實驗,教授學生熟悉和掌握三類生物大分子——DNA、RNA和蛋白質的基本制備和檢測分析技術。細胞組織實驗以細胞為實驗核心,編排22個實驗,教授學生熟悉和掌握細胞相關的基本實驗技術,包括細胞培養、細胞器的分離和各種細胞組分的制備及檢測分析技術,同時涵蓋組織水平檢測細胞組分的實驗技術。納米材料實驗以常見的納米材料為實驗現像,編排11個實驗,教授學生熟悉和掌握生物醫學工程相關納米材料學科中常見的納米材料的制備、表征和生物檢測應用技術。這些納米材料包括鐵、金、量子點等無機納米粒子和脂質體、殼聚糖等有機納米粒子。本書編寫的實驗體繫,有助於繫統培養學生從事牛命科學、納米材料科學及生物醫學工程的實驗研究能力。等