●章結腸癌及乳酸菌功能關繫概述節引言一、結腸癌簡介二、結腸癌發病癥狀三、乳酸菌抑制結腸癌的可能途徑第二節人結腸癌的發病原因一、結腸癌發病原因簡述二、環境化學物質誘發的結腸癌三、飲食因素誘發的結腸癌四、細菌酶誘發的結腸癌第三節乳酸菌調控機體免疫功能一、乳酸菌對非特異性免疫功能的影響二、乳酸菌對特異性免疫功能的影響三、乳酸菌激活機體的抗腫瘤免疫第二章乳酸菌抗結腸癌功能研究進展節乳酸菌抗結腸癌作用的機理一、乳酸菌降低食源性致癌物質的毒性二、乳酸菌抑制癌細胞生長及誘導癌細胞凋亡三、乳酸菌對潛在致癌物質致癌作用的阻斷四、乳酸菌對飲食誘發結腸癌作用的阻斷第二節乳酸菌不同菌體成分抗結腸癌作用機理一、乳酸菌的菌體細胞抗結腸癌作用研究二、乳酸菌的菌體細胞壁抗結腸癌作用研究三、乳酸菌的菌體細胞質抗結腸癌作用研究四、乳酸菌的菌體代謝產物抗結腸癌作用研究第三節乳酸菌與線粒體凋亡信號途徑一、活性氧族二、線粒體凋亡途徑第四節國內開展的課題相關研究第三章乳酸菌抗腫瘤研究技術方法節乳酸菌抗腫瘤研究設施、材料一、實驗儀器與設備二、實驗所用試劑與藥品三、實驗所用菌株與細胞四、實驗用培養液第二節乳酸菌抗腫瘤研究檢測方法一、對結腸癌細胞增殖抑制能力的測定二、乳酸菌對人腸道上皮細胞黏附性能的測定三、乳酸菌對酸耐受能力的測定四、乳酸菌對膽鹽耐受能力的測定五、乳酸菌16S rDNA 的鋻定六、蛋白濃度的測定七、乳酸菌肽聚糖分子量的檢測八、乳酸菌肽聚糖氨基酸組成分析九、乳酸菌菌體和肽聚糖的形態學觀察十、HT-29細胞毒性的測定十一、HT-29細胞形態學觀察十二、HT-29細胞DNA損傷的測定十三、HT-29細胞凋亡與壞死的測定十四、HT-29細胞周期的測定十五、HT-29細胞線粒體膜電位的測定十六、HT-29細胞ROS的檢測十七、HT-29細胞線粒體和胞漿中細胞色素C的檢測十八、HT-29細胞總RNA的提取十九、體外反轉錄合成及RT-PCR反應二十、HT-29細胞總蛋白提取與蛋白含量的測定二十一、HT-29細胞總蛋白的SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳二十二、Western blot分析第四章乳酸菌抗腫瘤核心技術研究一、抗結腸癌功能乳酸菌菌株的體外篩選二、抗結腸癌功能乳酸菌菌體成分的篩選三、乳酸菌肽聚糖對HT-29細胞的抑制作用四、乳酸菌肽聚糖誘導HT-29細胞凋亡途徑的研究五、乳酸菌肽聚糖誘導HT-29細胞凋亡線粒體途徑研究六、數據處理及統計分析第五章抗結腸癌功能乳酸菌的篩選節引言第二節基於抑制HT-29細胞增殖能力篩選抗結腸癌乳酸菌第三節基於乳酸菌的益生功能篩選抗結腸癌功能乳酸菌一、乳酸菌黏附於腸上皮細胞的能力二、乳酸菌對模擬胃液的耐受能力三、乳酸菌對模擬小腸液的耐受能力第四節乳酸菌菌種鋻定第五節本章小結第六章抗結腸癌功能乳酸菌菌體成分的篩選節引言第二節乳酸菌細胞壁和細胞質的提取及蛋白含量測定一、考馬斯亮藍G-250標準曲線二、乳酸菌細胞壁和細胞質蛋白質濃度計算第三節基於抑制HT-29細胞增殖能力篩選乳酸菌菌體成分一、乳酸菌細胞壁和細胞質對HT-29細胞增殖的抑制二、乳酸菌細胞壁和細胞質對HT-29細胞的毒性作用第四節基於誘導HT-29細胞DNA損傷篩選乳酸菌菌體成分一、單細胞凝膠電泳實驗二、瓊脂糖凝膠電泳實驗第五節基於誘導HT-29細胞凋亡篩選乳酸菌菌體成分一、乳酸菌細胞壁和細胞質誘導HT-29細胞的凋亡二、乳酸菌細胞壁和細胞質對HT-29細胞膜電位的影響三、乳酸菌細胞壁和細胞質對HT-29細胞周期的影響四、乳酸菌細胞壁和細胞質對HT-29細胞形態學的影響第六節乳酸菌細胞壁對正常細胞毒性影響第七節本章小結第七章乳酸菌肽聚糖對HT-29細胞抑制作用節引言第二節乳酸菌肽聚糖對HT-29細胞增殖的抑制一、5-氟尿嘧啶對HT-29的毒性作用二、MTT實驗三、臺盼藍染色實驗第三節乳酸菌肽聚糖理化性質分析一、乳酸菌肽聚糖蛋白含量的測定二、乳酸菌肽聚糖分子量的測定三、乳酸菌肽聚糖氨基酸組成及含量四、掃描電鏡觀察乳酸菌肽聚糖形態五、透射電鏡觀察乳酸菌肽聚糖形態第四節乳酸菌肽聚糖誘導HT-29細胞凋亡一、HE染色二、Hoechst熒光染色三、透射電鏡觀察乳酸菌肽聚糖誘導HT-29細胞線粒體的損傷四、乳酸菌肽聚糖對HT-29細胞周期的影響五、乳酸菌肽聚糖誘導HT-29細胞凋亡第五節乳酸菌肽聚糖對正常細胞毒性影響第六節本章小結第八章肽聚糖誘導HT-29細胞凋亡途徑研究節引言第二節乳酸菌肽聚糖對HT-29細胞凋亡相關基因的影響一、HT-29細胞總RNA的提取二、乳酸菌肽聚糖對HT-29細胞凋亡相關基因的影響三、乳酸菌肽聚糖對HT-29細胞Cyto-C基因表達的影響第三節乳酸菌肽聚糖誘導HT-29細胞凋亡機制研究一、乳酸菌肽聚糖誘導HT-29細胞線粒體膜電位的損失二、乳酸菌肽聚糖誘導HT-29細胞ROS的堆積三、乳酸菌肽聚糖誘導HT-29細胞線粒體Cyto-C的釋放四、乳酸菌肽聚糖誘導HT-29細胞凋亡相關蛋白的變化第四節本章小結總結展望參考文獻

本專著以本實驗室人員從中國西部地區傳統發酵食品及嬰兒、成.人糞便中分離出的乳酸菌為供試菌株，以標準菌株Lactobacillus rhamnosus GG（ATCC 43121，USA）為陽性對照菌株，篩選出具有益生功能（包括黏附於腸上皮細胞能力、耐受模擬胃液和模擬腸液能力），又具有顯著抑制人結腸癌HT-29細胞增殖能力的4株乳酸菌（M5、X11、X12和K14）。再經過抗癌功能篩選，很終獲得菌株X12、M5的細胞壁能顯著誘導HT-29細胞DNA損傷和凋亡，並深入探討其誘導結腸癌細胞凋亡的機理。

王淑梅 著

    章結腸癌及乳酸菌功能關繫概述節引言一、結腸癌簡介結腸癌（Colon cancer）是威脅人類健康和生命的一類惡性疾病（圖1-1），其發病率和死亡率均很高。結腸癌在男性癌癥發病率中僅次於肺癌和前列腺癌，位居第三位，而在女性癌癥發病率僅次於肺癌和乳腺癌。圖1-1結腸結構圖與結腸癌Fig 1-1The structure of colon and colon cancer在中國結腸癌每年的新增病例高達40萬，而優選每年的新增病例約1 000多萬。結腸癌主要為腺癌、黏液腺癌、未分化癌。人結腸癌多數發生在大腸底部，在直腸內及其附近的地方，直腸與乙狀結腸交界。結腸癌可沿腸壁環行發展，沿腸管縱徑上下蔓延或向腸壁深層浸潤，除經淋巴管、血流轉移和局部侵犯外，還可向腹腔內種植或沿縫線、切口面擴散轉移。大體形態呈息肉狀或潰瘍型等。慢性結腸炎患者、結腸息肉患者、男性等

前言結腸癌是威脅人類健康和生命的惡性疾病，是世界上第三大癌癥，其發病率和死亡率均很高。結腸癌多數發生在大腸底部，在直腸內或者附近的地方。結腸癌的致癌因素有很多，如遺傳因素、環境因素和飲食因素等，這些因素通常是協同作用而引發癌癥，但是其中最重要的誘發因素是飲食因素。高脂肪、高蛋白和低纖維的飲食導致人結腸癌的發病率上升，而攝入乳酸菌對結腸癌有預防和抑制作用。研究顯示，人體攝入乳酸菌對結腸癌有一定的抑制作用。乳酸杆菌和雙歧杆菌作為乳酸菌的重要成員廣泛存在於人體內。兩者不僅是人體生理性細菌，維持宿主腸道的健康，還一定程度上抑制癌癥的發生。本專著以本實驗室人員從中國西部地區傳統發酵食品及嬰兒、成人糞便中分離出的乳酸菌為供試菌株，以標準菌株鼠李糖乳酸杆菌（Lactobacillus rhamnosus）GG（ATCC 43121，USA）為陽性對照菌株，篩選出具有顯著抑制人結腸癌HT-29細胞增殖能力等