部分動物細胞培養



動物細胞培養概述2



一、動物細胞培養的基本概念及優缺點2



二、動物細胞培養發展史4



三、動物細胞培養的應用6



四、動物細胞培養工作的基本要求和工作方法8



【難點自測】9



項目一VERO細胞的傳代培養10



【項目介紹】10



一、項目背景10



二、學習目標10



三、項目任務10



【項目實施】10



任務一VERO細胞培養前的準備10



·知識11



一、培養細胞的生長條件11



二、動物細胞培養設備14



三、動物細胞培養用品18



四、動物細胞培養用液25



五、動物細胞培養常用的消毒和無菌處理方法31



·操作規程34



一、動物細胞培養常用設備的使用34



二、動物細胞培養用品的清洗、包裝和滅菌36



三、動物細胞培養用液的配制和無菌處理39



四、動物細胞培養的無菌操作41



任務二VERO細胞的傳代和觀察43



·知識43



一、動物細胞傳代培養技術43



二、培養細胞的細胞生物學45



三、培養細胞的觀察和檢測技術52



·操作規程58



一、VERO細胞的傳代培養58



二、VERO細胞的常規觀察59



任務三VERO細胞的凍存和復蘇60



·知識60



一、細胞的凍存60



二、細胞的復蘇61



三、細胞活性檢查61



四、細胞計數62



· 操作規程63



一、VERO細胞的凍存63



二、VERO細胞的復蘇64



三、VERO細胞的活性檢查65



【項目拓展知識】66



一、動物細胞培養實驗室的設計與布局66



二、動物細胞培養的其他常用液67



三、培養細胞的運輸和短期保存68



【項目難點自測】69



項目二雞胚成纖維細胞的原代培養71



【項目介紹】71



一、項目背景71



二、學習目標71



三、項目任務71



【項目實施】71



任務一組織塊法培養雞胚成纖維細胞71



·知識71



一、培養細胞的取材72



二、組織塊培養法73



·操作規程74



一、操作用品74



二、操作步驟75



任務二消化法培養雞胚成纖維細胞76



·知識76



一、組織材料的分離76



二、消化培養法77



·操作規程78



一、操作用品78



二、操作步驟78



【項目拓展知識】79



一、正常組織細胞的培養79



二、腫瘤細胞培養82



【項目難點自測】85



項目三CHO細胞的大規模培養87



【項目介紹】87



一、項目背景87



二、學習目標87



三、項目任務87



【項目實施】88



·知識88



一、動物細胞大規模培養技術概述88



二、動物細胞大規模培養的方法89



三、動物細胞培養反應器96



四、動物細胞大規模培養技術的操作方式100



·操作規程101



【項目拓展知識】105



一、植物細胞大規模培養技術的概念105



二、植物細胞大規模培養的應用和工業前景105



三、植物細胞大規模培養流程107



四、植物細胞的規模化培養體繫的建立107



五、植物細胞的大規模培養方法109



六、植物細胞生物反應器111



【項目難點自測】113



項目四抗人血白蛋白雜交瘤細胞繫的制備115



【項目介紹】115



一、項目背景115



二、學習目標115



三、項目任務115



【項目實施】115



任務一人血白蛋白免疫小鼠的準備115



·知識115



一、單克隆抗體的概念115



二、雜交瘤技術制備單克隆抗體的基本原理116



三、雜交瘤技術制備單克隆抗體的主要過程116



四、動物免疫116



·操作規程117



一、操作用品117



二、操作步驟117



任務二骨髓瘤細胞和脾細胞的融合118



·知識118



一、脾細胞、骨髓瘤細胞及飼養細胞的制備118



二、細胞融合和雜交瘤細胞的篩選119



·操作規程121



一、操作用品121



二、操作步驟121



任務三抗人血白蛋白雜交瘤細胞的篩選124



·知識124



一、酶聯免疫吸附法124



二、雙向擴散法124



·操作規程125



任務四抗人血白蛋白雜交瘤細胞的克隆培養126



·知識126



一、有限稀釋法127



二、軟瓊脂平板法127



三、顯微鏡操作法127



四、熒光激活分離法127



·操作規程128



【項目拓展知識】128



一、雜交瘤技術的誕生128



二、雜交瘤細胞株的凍存和復蘇129



三、單克隆抗體的大量制備與純化129



四、細胞的基因轉染技術130



【項目難點自測】132







第二部分植物細胞培養



植物細胞培養概述136



一、植物組織培養136



二、植物細胞培養137



三、植物組織細胞培養的發展史138



四、植物組織細胞培養的應用140



【難點自測】142



項目五胡蘿卜細胞的懸浮培養144



【項目介紹】144



一、項目背景144



二、學習目標144



三、項目任務144



【項目實施】145



任務一MS培養基的制備145



·知識145



一、植物細胞培養的實驗室條件145



二、植物細胞培養的培養基150



·操作規程156



任務二胡蘿卜愈傷組織的誘導159



·知識159



一、外植體的選擇和預處理159



二、植物愈傷組織培養的形成過程161



三、植物愈傷組織培養的一般程序162



四、植物組織細胞培養的無菌操作163



·操作規程163



任務三胡蘿卜細胞的懸浮培養164



·知識164



一、單細胞的分離164



二、懸浮培養細胞的生長和測定166



三、懸浮培養細胞的同步化167



四、植物細胞培養的環境條件167



·操作規程169



【項目拓展知識】170



一、植物細胞的固定化培養170



二、植物單細胞培養172



【項目難點自測】174







附錄細胞培養技術常用術語中英文對照177



參考文獻 182