目錄
前言
第1章 緒論 1
1.1 百合枯萎病 1
1.1.1 癥狀和特點 1
1.1.2 病原 2
1.1.3 發病規律 5
1.1.4 綜合防治 5
1.2 體細胞無性繫誘變篩選抗病種質的相關進展 8
1.2.1 體細胞無性繫變異 8
1.2.2 離體篩選的原理、程序和選擇方法 8
1.2.3 離體誘變育種 9
1.3 百合組織培養研究進展 14
1.4 植物細胞懸浮培養技術研究進展 15
1.4.1 愈傷組織的誘導 15
1.4.2 影響懸浮細胞繫建立的因子 16
1.5 尖孢鐮刀菌抗性機制的研究進展 17
1.5.1 尖孢鐮刀菌抗性機制的細胞學研究 17
1.5.2 尖孢鐮刀菌抗性機制的生理學研究 18
1.5.3 尖孢鐮刀菌抗性機制的分子基礎研究 19
1.6 尖孢鐮刀菌毒素作用機制的研究 22
第2章 百合懸浮細胞繫的建立 25
2.1 懸浮細胞繫的初始建立 25
2.2 繼代次數與細胞形態之間的關繫 26
2.3 關於百合細胞懸浮培養的討論 26
第3章 百合抗尖孢鐮刀菌細胞突變繫的篩選 28
3.1 尖孢鐮刀菌百合專化型毒素粗提液的活性和篩選壓的確定 29
3.1.1 尖孢鐮刀菌百合專化型毒素粗提液的活性 29
3.1.2 篩選壓的確定 31
3.2 百合抗尖孢鐮刀菌枯萎病無性繫的篩選 31
3.3 百合抗尖孢鐮刀菌枯萎病無性繫的抗病性鋻定 32
3.4 關於篩選抗病無性繫的討論 34
3.4.1 真菌毒素及其篩選技術 34
3.4.2 突變體的鋻定技術 34
第4章 百合抗尖孢鐮刀菌細胞突變繫的組織細胞學抗性 35
4.1 抗病無性繫和感病無性繫的根部結構 35
4.2 抗病無性繫和感病無性繫在接種以後根部的細胞超微結構變化 36
4.3 關於抗病無性繫組織抗性的討論 40
第5章 百合抗尖孢鐮刀菌細胞突變繫的生化抗性 41
5.1 抗病無性繫和感病無性繫的POD活性變化 42
5.2 抗病無性繫和感病無性繫的PAL活性變化 42
5.3 抗病無性繫和感病無性繫的PPO活性變化 43
5.4 抗病無性繫和感病無性繫的β-1，3-葡聚糖酶活性變化 44
5.5 抗病無性繫和感病無性繫的幾丁質酶活性變化 44
5.6 關於抗病無性繫生理抗性的討論 45
第6章 百合抗尖孢鐮刀菌細胞突變繫的轉錄組分析 46
6.1 樣品總RNA提取質量分析 46
6.2 測序結果統計分析 47
6.3 組裝結果統計和評估 50
6.3.1 組裝結果統計 50
6.3.2 組裝結果評估 50
6.4 Unigene的功能注釋 52
6.4.1 ORF預測 52
6.4.2 SSR分析 52
6.4.3 差異表達基因聚類 52
6.5 SSR分析 57
6.6 百合抗病無性繫和感病無性繫及不同接種時間點差異基因分析 57
6.6.1 百合抗病無性繫和感病無性繫兩分組差異基因篩選 57
6.6.2 差異基因功能注釋及分類 59
6.7 Q-PCR 驗證 64
6.8 關於轉錄組測序技術旳應用 65
6.9 關於Unigene的生物信息學的注釋 67
6.10 抗病性相關代謝路徑及差異基因分析 67
6.10.1 寄主植物激素信號轉導途徑 67
6.10.2 寄主植物與病原菌互作 68
6.10.3 細胞壁防衛抗病途徑 68
第7章 百合抗尖孢鐮刀菌細胞突變繫的蛋白質組分析 70
7.1 蛋白質雙向電泳技術的建立 71
7.1.1 百合總蛋白質的提取方法 71
7.1.2 蛋白質定量 71
7.1.3 蛋白質質量檢測 72
7.1.4 雙向電泳 72
7.1.5 染色及圖像采集分析 72
7.1.6 百合總蛋白質提取方法的比較 73
7.1.7 百合總蛋白質雙向電泳上樣量的優化 74
7.1.8 百合總蛋白質除鹽時間的優化 75
7.2 百合雙向電泳差異蛋白質組分析 76
7.2.1 百合葉片總蛋白質的提取、定量 76
7.2.2 差異蛋白點處理及質譜分析 76
7.2.3 數據庫檢索 76
7.2.4 百合抗病無性繫和感病無性繫的雙向電泳圖譜分析 77
7.2.5 百合抗病無性繫和感病無性繫的蛋白質功能鋻定及豐度變化分析 83
7.3 iTRAQ蛋白質組分析 83
7.3.1 蛋白質的提取、濃度測定及檢測 83
7.3.2 iTRAQ標記分析 84
7.3.3 差異蛋白分析 86
7.3.4 GO 功能分類富集分析 87
7.3.5 代謝途徑分析 90
7.4 關於百合蛋白質提取及雙向電泳技術優化的問題 94
7.5 百合蛋白質雙向電泳差異蛋白的抗病性 95
7.5.1 光合作用和能量代謝相關蛋白參與百合的防衛反應 95
7.5.2 防衛反應相關蛋白是抗病的關鍵因素 96
7.5.3 可能與百合抗病無性繫抗病性相關的其他蛋白質 96
7.6 關於iTRAQ蛋白質組分析的問題 96
參考文獻 98
附表 116