了得網自然科學_病毒的電子顯微學研究

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病毒,電子顯微鏡分析

內容簡介

《病毒的電子顯微學研究》主要介紹研究病毒的各種電子顯微學方法以及**進展和取得的成果，內容包括：病毒樣品的超薄切片技術，病毒的分離、純化和病毒樣顆粒的組裝，病毒免疫電鏡技術，生物材料的高分辨率電子顯微技術，冷凍電鏡單顆粒技術和冷凍電鏡電子斷層成像技術等。理論介紹盡量做到淺顯易懂，《病毒的電子顯微學研究》示例也取自經典的或者*近幾年的科研成果。此外，在緒論中簡略概述病毒的電子顯微學研究的進展。
病毒的電子顯微學研究在近十多年來有許多理論和技術上的突破，發展迅速、成果斐然，其中也有《病毒的電子顯微學研究》部分作者參與的工作，《病毒的電子顯微學研究》均做了翔實介紹。

目錄
前言
第1章緒論 1
1.1 病毒形態、結構和化學組分 1
1.1.1 電鏡下的病毒形態 1
1.1.2 病毒的結構 4
1.1.3 病毒的組分 7
1.2 病毒分類繫統 10
1.2.1 病毒的主要類群 11
1.2.2 病毒的分類和命名 12
1.2.3 病毒分類繫統 15
1.3 病毒入侵、繁殖及病理變化 16
1.3.1 病毒的人侵 16
1.3.2 病毒的繁殖 18
1.3.3 病毒引起宿主細胞的病理變化 20
1.3.4 病毒的釋放 28
1.4 病毒的電鏡診斷和鋻定 29
1.4.1 病毒電鏡診斷鋻定的依據 29
1.4.2 病毒電鏡診斷鋻定的特點 31
第2章病毒樣品的超薄切片技術 37
2.1 常溫超薄切片技術的取材與固定 38
2.1.1 取材 38
2.1.2 固定 39
2.2 常溫超薄切片技術的脫水、滲透和包埋 51
2.2.1 脫水 51
2.2.2 滲透和包埋 53
2.3 常溫超薄切片的制作和染色 57
2.3.1 常溫超薄切片的制作方法 57
2.3.2 染色液和染色方法 64
2.4 冷凍超薄切片技術 67
2.4.1 取材、醛固定和包封 67
2.4.2 冷凍保護處理與冷凍固定 69
2.4.3 冷凍超薄切片 71
2.5 冷凍置換技術 74
2.5.1 冷凍置換的基本原理 74
2.5.2 冷凍置換介質 74
2.5.3 冷凍置換的方法 75
2.5.4 影響冷凍置換的因素 76
第3章病毒的分離、純化與病毒樣顆粒的組裝 78
3.1 病毒的分離純化 79
3.1.1 病毒的分離 79
3.1.2 病毒的純化 82
3.2 病毒純化的超速離心技術 83
3.2.1 原理與設備 84
3.2.2 病毒離心純化方法 87
3.3 病毒衣殼蛋白的體外表達與病毒樣顆粒的組裝 90
3.3.1 病毒樣顆粒在大腸杆菌表達繫統中的表達與組裝 91
3.3.2 病毒樣顆粒在昆蟲杆狀病毒表達繫統中的表達與組裝 94
3.3.3 病毒樣顆粒體外表達研究進展 100
3.4 負染色技術 101
3.4.1 負染色液的制備 102
3.4.2 染色方法 102
3. 4.3 操作中的注意事項 103
第4章病毒免疫電鏡技術 106
4.1 概述 106
4.2 抗原-抗體免疫復合物電鏡技術 107
4.2.1 吸附法 107
4.2.2 修飾法 107
4.2.3 吸附-修飾法 108
4.2.4 凝集法 109
4.3 免疫標記電鏡技術的基本方法 109
4. 3.1 取材與固定 109
4.3.2 免疫標記方法 110
4.3.3 樣品包埋 112
4.3.4 對照實驗 114
4.4 鐵蛋白標記電鏡技術 114
4. 4.1 鐵蛋白標記抗體的制備 114
4.4.2 鐵蛋白標記電鏡技術的應用 115
4.5 酶標記電鏡技術 116
4. 5.1 酶標記抗體 116
4.5.2 PAP技術 117
4.5.3 酶標記電鏡技術的應用 117
4.6 膠體金標記電鏡技術 118
4.6.1 膠體金探針的制備技術 119
4.6.2 膠體金標記電鏡技術的應用 123
4.7 電鏡原位雜交技術 129
4.7.1 同位素標記cRNA探針電鏡原位雜交 130
4.7.2 生物素標記DNA探針電鏡原位雜交 131
4.7.3 地高辛標記rRNA探針電鏡原位雜交 133
4.7.4 電鏡原位雜交技術的注意事項 134
第5章生物樣品的高分辨電子顯微技術 135
5.1 電子顯微鏡的發明 135
5.2 磁透鏡的光學性質 137
5.2.1 磁透鏡的聚焦原理 137
5.2.2 磁透鏡的像差 139
5.2.3 磁透鏡的分辨本領、景深和焦深 141
5.3 像的反差形成原理 143
5.3.1 散射反差的形成與提高方法 144
5.3.2 提高散射反差的方法 145
5.3.3 相位反差 147
5.3.4 電子衍射 149
5.4 生物樣品的高分辨成像技術 152
5. 4.1 合軸、消像散和聚焦 153
5. 4.2 生物樣品的高分辨成像 161
第6章冷凍電鏡單顆粒技術與病毒研究 166
6.1 病毒的冷凍電鏡成像 167
6.1.1 如何獲得玻璃態的冰 168
6.1.2 冷凍制樣與樣品傳輸 169
6.1.3 低劑量成像 172
6.1.4 冷凍電鏡圖像的復原 174
6.2 病毒三維重構的單顆粒技術 175
6.2.1 單顆粒技術的發展現狀 176
6.2.2 病毒的結構特點 178
6.2.3 中央截面定理 181
6.2.4 取向和中心估計 182
6.2.5 重構基本流程 185
6.3 家蠶質多角體病毒（BmCPV)的形態與結構研究 189
6.3.1 CPV在8人分辨率下的結構 190
6.3.2 CSP蛋白的構像變化及其無縫連接 190
6.3.3 LPP蛋白的構像變化及其分子鉚接作用 193
6.3.4 TP蛋白的功能結構域及衣殼錨定作用 193
6.3.5 轉錄酶復合物（TEC)及dsRNA病毒的內轉錄機制模型 196
6.3.6 A球突蛋白及其MAb抗體復合物的研究 200
6.4 乙型肝炎病毒的結構研究 202
6.5 戊型肝炎病毒結構研究進展 203
第7章電子斷層成像技術與病毒研究 209
7.1 電子斷層成像技術簡介 209
7.1.1 電子斷層成像原理 209
7.1.2 多角度繫列電子投影圖像的獲取 210
7.1.3 投影圖像的配準 211
7.1.4 斷層圖像的三維重構 211
7.1.5 重建結果的去噪、分割和理解 212
7.2 電子斷層成像技術在病毒研究中的應用 212
7.2.1 電子斷層成像研究的樣品制備 212
7.2.2 電子斷層成像技術用於病毒顆粒的三維結構研究 213
7.2.3 電子斷層成像用於病毒與細胞的相互作用研究 218
7.2.4 電子斷層成像技術在其他方面的應用及展望 219
參考文獻 221
附錄國際病毒分類繫統的科與屬（ICTV， 2009年) 228
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