前言
緒論
第1章基因與基因工程
1．1基因
1．1．1基因的基本結構特征
1．1．2基因表迭調控
1．1．3基因打靶與基因沉默
1．2基因工程
1．2．1基因工程定義
1．2．2基因工程工具酶
1．2．3基因克隆載體
1．2．4基因工程基本操作步驟
1．2．5基因工程歷史
1．2．6基因工程應用
第2章動物克隆技術和理論
2．1動物克隆技術發展簡介
2．1．1動物胚胎分割技術
2．1．2動物細胞核移植技術
2．2動物克隆技術的基本原理
2．2．1胚胎分割的基本原理
2．2．2細胞核移植的基本原理
2．3動物克隆技術
2．3．1顯微操作器械
2．3．2胚胎分割
2．3．3細胞核移植
2．4動物克隆理論
2．4．1受體胞質對供體核的重編程
2．4．2核質互作
2．4．3核移植的線粒體問題
2．4．4哺乳動物的表現遺傳學調控
2．4．5DNA甲基化與動物克隆
2．4．6基因組印記與動物克隆
2．5小結
第3章動物轉基因技術
3．1動物轉基因技術和克隆技術的區別
3．2動物轉基因技術
3．2．1原核期胚胎的顯微注射技術
3．2．2逆轉錄病毒栽體侵染技術
3．2．3慢病毒栽體技術
3．2．4精子載體技術
3．2．5體細胞核移植技術
3．2．6ES細胞介導技術
3．2．7胞內單精注射技術
3．2．8受體介導的基因轉移
3．3動物轉基因新技術研究進展
3．3．1PGCs技術
3．3．2精原干細胞法
3．3．3基因打靶技術
3．3．4RNA干擾(RNAi)介導的基因沉默技術
3．3．5誘導多能干細胞轉基因技術
3．3．6人工染色體法
3．3．7雙順反子條件表達轉基因繫統法
3．3．8問題與展望
3．4外源重組基因導人動物細胞的其他方式
3．4．1電穿孔法
3．4．2基因槍法
3．4．3超聲波法
3．4．4磷酸鈣或DEAE-葡聚糖轉染法
3．4．5脂質體介導轉化法
3．4．6動物病毒介導轉導法
3．5提高轉基因效率的策略
3．5．1外源基因的整合機制
3．5．2轉基因表達載體的構建
3．6轉基因技術存在的問題
3．6．1成本高、整合效率總體比較低
3．6．2轉基因表達水平低
3．6．3難以控制轉基因在宿主基因組中的行為
3．6．4目的基因與動物生產性狀的多基因矛盾突出
3．6．5轉基因動物及其產品的安全性問題
第4章目的基因的分離
4．1核酸的制備
4．1．1DNA的制備
4．1．2RNA的制備
4．1．3人工合成核酸片段
4．1．4核酸樣品的分析與檢測
4．2基因文庫的構建
4．2．1原核生物基因組文庫的構建
4．2．2真核生物基因組文庫的構建
4．2．3cDNA基因文庫的構建
4．3目的基因的分離
4．3．1從基因文庫中篩選分離目的基因
4．3．2利用聚合酶鏈反應技術擴增目的基因
4．3．3利用差示分析法分離目的基因克隆
4．3．4應用基因定位克隆技術分離篩選目的基因
4．3．5標簽測序法分離目的基因
4．3．6基因的酶法合成
第5章轉基因細胞的制備
5．1受體細胞的類型
5．1．1原核受體細胞
5．1．2絲狀真菌受體細胞
5．1．3酵母受體細胞
5．1．4動物受體細胞
5．2重組基因導入原核受體細胞的主要途徑
5．2．1轉化
5．2．2轉導
5．2．3轉染
5．2．4電穿孔
5．2．5三親本雜交
5．3重組基因導人動物受體細胞
5．4重組子篩選
5．4．1遺傳表型直接篩選
5．4．2依賴於重組子結構特征分析篩選
5．4．3核酸分子雜交分析
5．4．4免疫化學分析檢測
5．4．5PCR篩選法
5．5轉基因細胞的檢測
5．5．1目的基因的整合檢測
5．5．2目的基因的表達檢測
5．5．3其他檢測
5．5．4轉基因細胞的核型分析
第6章卵母細胞體外成熟
6．1卵母細胞發育生物學特性
6．1．1卵泡發育和排卵
6．1．2卵母細胞卵膜的發生發育
6．1．3卵泡細胞在卵母細胞發育中的作用
6．1．4卵母細胞發育及成熟過程中超微結構的變化
6．2卵母細胞體外成熟
6．2．1卵母細胞體外成熟培養概況
6．2．2卵母細胞成熟的機理
6．2．3卵母細胞成熟培養
6．2．4影響卵母細胞體外成熟的因素
第7章胚胎體外培養和冷凍保存
7．1胚胎體外培養
7．1．1簡單化學限定培養液
7．1．2共同培養繫統
7．1．3添加肽類生長因子的培養繫統
7．1．4早期胚胎體外發育的影響因素
7．2胚胎冷凍保存
7．2．1胚胎冷凍保存的發展簡史
7．2．2胚胎冷凍保存的意義
7．2．3胚胎冷凍的基本原理
7．2．4胚胎冷凍及解凍的基本方法
7．2．5胚胎冷凍效果的鋻定
第8章轉基因克隆胚胎移植與附植
8．1胚胎移植
8．1．1胚胎移植概述
8．1．2轉基因克隆胚胎移植的準備
8．1．3受體的同期發情
8．1．4轉基因克隆胚胎移植
8．2附植
8．2．1胚泡遷移、定位和植入
8．2．2附植中的妊娠識別及其機理
第9章轉基因動物的檢測和安全性評價
9．1轉基因動物的檢測
9．1．1外源基因存在的檢測
9．1．2外源基因拷貝數的檢測
9．1．3外源基因整合位點數的檢測
9．1．4外源基因整合位點基因組序列的檢測
9．1．5轉基因表達的檢測
9．1．6轉基因動物檢測中存在的問題和展望
9．2轉基因動物的安全性評價
9．2．1轉基因動物安全性檢測的內容和方式
9．2．2轉基因動物研究及其產品的安全性評價
9．2．3轉基因動物食品的安全性評價
參考文獻