了得網醫學_醫學生物化學與分子生物學實驗(孫軍)

內容簡介

本書以醫藥、綜合性大學、師範和農林院校有關專業的本科生、長學制學生及研究生為對像，也可供其他生物化學與分子生物學實驗技術工作者參考。它是一本高等學校生物化學與分子生物學實驗教材，也是一本小型生物化學與分子生物學實驗技術工具書。全書內容分為生物化學技術基本理論（至六章）、分子生物學技術基本理論（第七至九章）、生物化學實驗和臨床生化檢驗（14個實驗）以及分子生物學實驗（10個實驗）。實驗部分共選編了24個實驗：7個常用的生化實驗和臨床生化檢驗，以及7個生物化學綜合性實驗，主要是培養學生對生物大分子進行分離分析的綜合實驗技能，同時也包含了實驗動物學、藥理學、生理學等相關基本知識和基本技能的綜合；10個分子生物學實驗以DNA重組的基本過程為主線，介紹重組DNA技術的各個環節。

章分光光度技術
節基本原理
一、光的基本知識
二、朗伯-比爾定律
三、吸光繫數
第二節分光光度計的基本結構和使用
一、分光光度計的基本結構
二、分光光度計的基本類型
三、常見分光光度計的使用
四、使用分光光度計的注意事項
第三節分光光度技術的應用
一、定量分析
二、定性分析
第四節分光光度法的誤差章分光光度技術
節基本原理
一、光的基本知識
二、朗伯-比爾定律
三、吸光繫數
第二節分光光度計的基本結構和使用
一、分光光度計的基本結構
二、分光光度計的基本類型
三、常見分光光度計的使用
四、使用分光光度計的注意事項
第三節分光光度技術的應用
一、定量分析
二、定性分析
第四節分光光度法的誤差
一、物理性原因產生的誤差
二、化學性原因引起的誤差
第二章色譜技術
節概述
一、色譜法的概念
二、色譜技術的特點和優點
三、色譜法的分類
第二節常用的色譜方法
一、吸附色譜
二、分配色譜
三、凝膠色譜
四、離子交換色譜
五、親和色譜
六、高效液相色譜
第三章電泳技術
節基本原理
一、蛋白質電荷的來源
二、遷移率
三、影響電泳速度的因素
第二節醋酸纖維薄膜電泳
第三節瓊脂糖凝膠電泳
一、核酸分子大小與瓊脂糖濃度的關繫
二、核酸構像與瓊脂糖凝膠電泳分離的關繫
三、瓊脂糖凝膠電泳基本方法簡介
第四節聚丙烯酰胺凝膠電泳
一、聚丙烯酰胺凝膠聚合原理及相關特性
二、聚丙烯酰胺凝膠電泳原理
三、SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳原理
四、聚丙烯酰胺凝膠等電聚焦電泳原理
五、聚丙烯酰胺凝膠雙向電泳原理
第五節染色方法
一、蛋白質染色
二、脂蛋白染色
三、核酸的染色
第四章離心技術
節離心技術的基本原理
一、離心力
二、相對離心力
三、重力及浮力
四、介質的摩擦阻力
五、沉降速度
六、沉降繫數
七、沉降時間
第二節離心機的分類
第三節離心分離的種類?
一、差速離心法
二、密度梯度離心法
第四節離心操作注意事項
第五章蛋白質組技術
節蛋白質組學
第二節蛋白質組分離技術
一、雙向凝膠電泳的特點
二、雙向凝膠電泳的基本步驟
第三節蛋白質組分析技術
一、質譜技術的發展及各種類型的質譜儀
二、質譜技術在蛋白質組研究中的作用
三、蛋白質組數據庫的建立
四、蛋白質組研究的前景
第六章生物大分子制備技術”
節預處理和細胞的分離
一、選擇材料及預處理
二、細胞的分離
第二節細胞的破碎及細胞器的分離
一、細胞的破碎
二、細胞器的分離
第三節生物大分子的提取、分離純化和定量
一、蛋白質的提取
二、蛋白質的分離純化
三、核酸的分離純化
四、蛋白質的定量
五、DNA、RNA的定量
第四節濃縮、干燥及保存
一、蛋白質的濃縮
二、核酸的濃縮
三、干燥
四、保存
第七章重組DNA技術
節目的基因的獲取
一、直接從染色體中分離
二、化學合成法
三、RT-PCR
四、聚合酶鏈反應（PCR）
第二節載體的選擇
一、克隆載體
二、表達載體
第三節分子克隆常用的工具酶
第四節限制性內切酶消化DNA及片段回收
一、限制性內切酶的選擇和運用
二、限制性內切酶的酶切
三、DNA片段的回收
第五節目的基因與載體片段連接
第六節重組DNA導入宿主細胞
一、大腸杆菌的轉化
二、電脈衝穿孔法轉化大腸杆菌
第七節含重組質粒的宿主菌落的篩選與鋻定
一、利用宿主細胞遺傳表型的改變進行篩選
二、分析重組子分子結構特性進行鋻定
第八章核酸分子雜交技術
節核酸分子雜交的基本理論
一、DNA變性
二、DNA復性¨
三、核酸分子雜交
第二節核酸探針及其標記
一、核酸探針
二、探針標記物
三、探針的標記方法
第三節核酸分子雜交
一、影響雜交的因素
二、固相雜交法
第九章聚合酶鏈反應（PCR）技術
節 PCR基本原理和影響因素
一、基本原理
二、PCR反應體繫
三、PCR反應步驟簡介
四、PCR引物設計原則
五、PCR的影響因素
六、PCR擴增過程中的一些疑難問題與解決方法
第二節逆轉錄PCR技術
一、RT-PCR反應基本步驟
二、RT-PCR注意事項
第三節 PCR技術進展
一、定量PCR
二、巢式PCR
第十章常用生化實驗及臨床生化檢驗
實驗一血糖的測定
實驗二蛋白質的定量測定
實驗三血紅蛋白與核黃素的凝膠柱色譜分離
實驗四氨基酸的離子交換柱色譜分離
實驗五血清蛋白醋酸纖維薄膜電泳
實驗六血清蛋白聚丙烯酰胺凝膠盤狀電泳
實驗七過氧化氫酶Km值的測定
實驗八酶的競爭性抑制作用（琥珀酸脫氫酶）
實驗九四氯化碳對小鼠肝髒的損傷
實驗十血清總膽固醇的測定
實驗十一回收實驗（尿素氮的回收）
實驗十二血清白蛋白、γ-球蛋白的分離純化及鋻定
實驗十三堿性磷酸酶的分離純化
實驗十四雙向電泳
第十一章分子生物學實驗——重組DNA表達載體的構建
實驗一質粒DNA的大量制備與純化
實驗二 DNA的純度、濃度的測定
實驗三目的基因的獲取
實驗四 DNA的限制性內切酶消化
實驗五從瓊脂糖凝膠中分離回收DNA片段
實驗六 DNA片段的連接反應
實驗七用重組質粒DNA轉化大腸杆菌
實驗八含重組質粒的細菌菌落的鋻定
實驗九 Southern印跡法
實驗十斑點雜交——地高辛標記核酸探針的斑點雜交（Dot blot）
實驗須知
實驗報告的書寫
參考文獻

在線試讀

章分光光度技術
第四節分光光度法的誤差
在分光光度法的實際應用中，測定結果往往會出現一些誤差。引起這種偏離的原因很多，大致可分為兩類：一類是物理性原因；一類是化學性原因。
一、物理性原因產生的誤差
物理性原因引起的誤差，主要指由分光光度計儀器本身引起的誤差，包括入射光波長不準確、入射光的單色性不好、微量的雜散光以及因光源的波動、檢測器靈敏度波動等引起的偏離等。即使是經過仔細調校的分光光度計，仍要注意以下原因引起的誤差。
（1）入射光的純度：比爾定律成立的一個重要前提是要采用單色光。但分光光度計實際使用的入射光並不是嚴格的單色光，而是由單色器從連續光譜中選擇出的一窄段範圍的復合光，仍有不同波長的幅射光同時存在。帶寬越窄，單色光愈純，對比爾定律的偏差就愈小。
（2）雜散光的干擾：散射光也是引起誤差的重要因素。這裡所說的散射光是指一切未經過測定溶液吸收，而又落到檢測器上引起干擾的光，如室內自然光，經過某些漏洞進入儀器而明顯增大了透光度，故高靈敏度的分光光度計宜安裝的光線較暗的室內。散射光也包括能透過比色杯的非測定需要的其他波長的光，因效果與散射光一樣，故也稱為散射光干擾。散射光干擾對高濃度測定特別有害，能使吸光度降低，標準曲線的高濃度部分向下彎曲。
（3）適當的吸光度測定範圍：即使將各種因素都控制好，對於濃度過大或過小的樣品，誤差仍然很大。因為濃度過大的樣品，其吸光度過高，影響檢測器的靈敏度，且讀數標尺刻度的精度差，誤差亦大，故難於準確。濃度過低的樣品，其吸光度小，則因與儀器本身因素有關，也容易引起檢測器標尺上的讀數誤差。從理論上推算，相對誤差的小的部分在透光度為36.8％處（或吸光度為0.4343處），故通常認為測定值在吸光度0.20～0.70範圍內（透光度為20％～65％）誤差較小，超出此範圍，相對誤差均會增大。
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